几丁质酶产生菌的筛选及其基因克隆

摘要

本文采用平板筛选法对本实验室保存的50株拮抗细菌进行几丁质酶活性分析。将菌株活化后在几丁质平板上点样，30℃培养2d后观察结果。结果显示，有一株解淀粉芽抱杆菌(菌株CAB-1，可有效防治黄瓜白粉病)产生了明显的透明圈，说明其具有几丁质酶活性。提取该菌株基因组DNA，根据GenBank上芽抱杆菌同源几丁质酶基因序列设计引物(P15'ATGATTTTAA GTCTGTCTT3',P2 5'CTCTCCTTTCGTCCACCATT3')对其进行扩增，得到大小约1600bp的片段。PCR产物经回收纯化后，连接到pGM-T载体，转化大肠杆菌DHSao经PCR鉴定后将阳性转化子送到北京诺赛基因公司进行测序。经测序后Blast分析，该序列与己知的几丁质酶基因序列同源性极高，说明其为几丁质酶基因片段。