几丁质酶产生菌筛选鉴定及产酶性能研究

摘要

本文从土壤中共筛得156株菌,其中在LB培养基上筛得菌种38株,PDA培养基51株,高氏一号培养基67株,能在几丁质培养基上生长的菌共33株,其中有四株高产几丁质酶菌株,产酶能力从高到低菌株编号依次为:C65-2,L63-4,G15-2,G38-4,对四株菌进行了菌种鉴定,结果为:C65-2为烟曲霉(Aspergillus fumigatus),L63-4为类芽孢菌(Paenibacillus sp),G15-2为绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),G38-4为一株曲霉,对Aspergillusfumigatus C65-2进行了产酶条件优化,其中对种子进行优化结果显示,Aspergillus fumigatus C65-2更易利用的碳源为葡萄糖,更易利用的氮源为玉米浆,种子初始最适pH为4.96,菌体千重36h后达到最大,对产酶培养基进行优化结果显示,产酶诱导物为壳聚糖时酶活最高,发酵42h后酶活达到最高,初始最适pH为6.0,实验结果显示,壳聚糖添加量达到2％时结球现象基本消失,测得最高酶活可达6.9 U/mL,酶活力较优化之前提高了210％。酶学性质研究表明几丁质酶分子量大小约为20Kda,几丁质酶最大吸收波长为207,酶在60℃下保温50 min酶活降为0,最适酶反应温度是55℃,酶反应最适pH为7.0,Mg2+,Cu2+对酶反应有促进作用,Fe3+对酶反应有抑制作用,酶解产物为二糖以上壳寡糖。
　　 L63-4是一株芽孢杆菌,这使得此菌更有利于菌种保藏,不易退化,此菌的酶解产物也较丰富,所以,L63-4也是一株较有前景的菌。G15-2菌株形态比较特殊,开始颜色为白色,后逐渐变为红色,最后又变成墨水蓝,甚至将琼脂培养基也完全染成蓝色,查文献中得知,能分泌深蓝色色素的微生物很罕见,所以,G15-2可以作为产微生物色素的菌株进行研究。