柞蚕全长cDNA文库中筛选到一个与蛹滞育解除相关的KK-42结合蛋白基因

摘要

我们成功构建了柞蚕Antheraea pernyi蛹的全长cDNA文库。总RNA提取自处于滞育后期的单个新鲜雌蛹。所构建文库的滴度是5×105cfu/ml，重组率达到95%。表达序列标签（EST）测序得到了250个有效序列，它们可以聚成175个单基因簇，其中包括24个重叠群和151的单拷贝。生物信息学分析结果表明，这175个单基因簇中有97个（55.4%）在数据库中有同源序列（其中只有5个是柞蚕已知基因），37个（21.2%）在数据库中有EST同源序列但缺乏功能注释，41个（23.4%）为新的EST。通过EST测序，我们从该文库中鉴定了柞蚕KK-42结合蛋白基因（ApKK42-BP；GenBank登录号FJ744151），该基因与天蚕Antheraea yamamai的KK-42结合蛋白基因在氨基酸序列上的一致性高达95%，而KK-42结合蛋白基因与天蚕的幼虫滞育解除有关。蛋白质序列分析表明，ApKK42-BP是一个胞外蛋白而不是膜蛋白，其信号肽位于第1-18。ApKK42-BP包括2个推测的保守功能域abhydro_lipase和abhydrolase_1，这一结果表明该蛋白可能是一种脂肪酶。基于EST数量的表达发现，ApKK42-BP在滞育的后期是一个高表达基因，表明该基因与柞蚕的蛹滞育解除也有关系。