红小丑鱼HSP70基因cDNA片段克隆及序列分析

摘要

热休克蛋白,又名热休克蛋白,是生物体内与抗逆相关的一类十分重要的蛋白,作为一种在进化过程中有高度保守性的应激蛋白,对维持机体的自身稳定性起着重要作用.除高温诱导外,许多损伤因素、应激刺激作用后,都可以导致细胞发生热休克反应,诱导热休克蛋白的合成.在实验中我们采用的是标准曲线相对定量法，该方法就需要一个在刺激因子作用下表达相对稳定的基因作为内标。鱼类β-actin蛋白大多数是由375个氨基酸组成，之间同源性可高达100%;核酸序列长度有些差异，但序列之间的同源性也为90%左右。β-actin(肌动蛋白)mRNA水平在多数器官组织和各类细胞培养中稳定表达，而且在多数刺激因素作用下表达相对稳定，因而能作为检测基因表达时的内标，所以我们这里选用β-actin基因作Real-time PCR检测红小丑鱼HSP70 mRNA组织表达的内标。实验结果表明热休克蛋白的诱导合成与海洋生物耐热性及耐盐性的获得有平行关系。