甘薯遗传转化体系的建立与转基因植株的生产

摘要

以甘薯品种栗子香和徐薯18的胚性悬浮细胞为受体材料，建立了甘薯有效的遗传转化体系。结果表明，在共培养基中添加乙酰丁香酮能够显著提高转化效率，适宜的乙酰丁香酮浓度为30mg/l。对栗子香和徐薯18胚性细胞团的潮霉素敏感性进行了分析，结果表明，选择培养基中适宜的潮霉素浓度分别为25 mg/l和7 mg/l。用携带含有hpt基因和gusA基因的pCAMBIA1301质粒的根癌农杆菌菌株EHA105侵染栗子香和徐薯18的胚性细胞团，共培养3 d后,通过选择培养获得了抗性愈伤组织。将这些抗性愈伤组织转移到再生培养基上，经过体细胞胚胎发生途径再生出拟转基因植株。GUS检测、PCR、dot blot和Southern blot分析表明，gusA基因已经整合到甘薯基因组中，T-DNA插入拷贝数为1～4个；转基因植株占拟转基因植株的约90%。gusA基因在块根中稳定表达。据统计，利用该遗传转化体系，从1 g鲜重的胚性细胞团，获得约500株转基因植株。利用上述遗传转化体系，我们目前已经将OCⅠ基因导入到栗子香和徐薯18中，获得批量转基因植株。对转基因植株进行茎线虫病鉴定圃和室内块根茎线虫接种鉴定，结果表明，转基因植株的茎线虫病抗性显著提高。