棉铃虫HSP70基因cNDA片段的克隆与分析

摘要

本研究通过RT-PCR同源扩增,首次克隆了棉铃虫(Heliothis armigera)热休克蛋白70 (HSP70)cDNA片段.该cDNA片段长1337bp,其中包括开放阅读框(ORF)的起始密码子ATG,推测该序列编码445个氨基酸.序列分析发现,所克隆的棉铃虫HSP70部分序列包含真核生物HSP70高度保守的3个家族标签:IDLGTTYS、IFDLGGGTFDVSIL和IVLVGGSTRIPKVQK.此外,还存在Dank特征基序DLGTT-S-V,ATP/GTP结合位点AEAYLGKT(133-140),非细胞器基序(Non-organellar consensus motif) RARFEEL,核定位序列(Bipartive nuclear localization signals) KRKYKKDLTTNKRALRRL、KRALRRLRTSCERAKRTL和1个糖基化位点NKSI.同源序列比对结果表明,棉铃虫HSP70与其他真核生物的HSP/HSC70有着较高序列同源性(91％-99％),其中与粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)热休克蛋白70 (HSP70)同源性最高,迭99％.系统进化树分析表明,棉铃虫的Hsp70氨基酸残基序列与甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)、粘虫(Mythimna separata)、粉纹夜蛾等物种的Hsp70聚在一支,而与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的Hsp70相分离.半定量RT-PCR结果表明,HSP70在对照组和感染组中均有表达,但两者没有显著性差异(P＞0.05),初步推断该蛋白是一个结构型HSP70.