苹果轮纹病菌(Botryosphaer ia dothidea) PCR快速检测方法的建立

摘要

苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)引起的苹果轮纹病是苹果主要病害之一,对树干,特别是果实的为害很大.苹果果实从近成熟开始发病,储藏期继续发病,平均年份果实发病率为20％～30％,有的年份高至50％～60％,给苹果生产带来极大的损失.果实被侵染后呈同心轮纹状病斑,病部果肉腐烂,严重时5～6d可全果腐烂.目前,中国苹果的主栽品种为富士,约为50％,其次为红帅和金冠,分别占10％和6％.这些主栽品种(富士、红帅和金冠)果实对苹果轮纹病均高度感病,随着主栽品种的大面积种植,轮纹病害发生的面积也在不断扩大,所以研究一种对该病原的快速鉴定方法也显得更加必要.本实验室根据自己所采集苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)基因组核糖体ITS列，设计了一对特异性扩增轮纹病菌的引物ipF和ipR，扩增目的片段为347bp，结果发现，从被侵染果实的果皮和果肉处提取的DNA均能扩增出特异性条带，而健康果实DNA无特异性条带扩增;对接种后病斑的组织进行分离、形态鉴定。结果表明分离菌株均为Botryosphaeria dothidea。本研究结果对苹果轮纹菌快速鉴定、田间预测预报、采前及采后果实轮纹病检测及检验检疫的方法提供了快速与准确的手段，有着很重要的实际运用意义。