紫花苜蓿PHYA和PHYB mRNA表达水平FQ—PCR检测方法的建立与应用

摘要

紫花苜蓿的秋眠与光敏色素基因的表达紧密相关，实时逆转录聚合酶链反应(FQ—PCR)是研究基因表达时空变化最直接和准确的方法之一。为了建立一种快速、灵敏检测紫花苜蓿PHYA和PHYB基因mRNA表达水平的反应体系，本研究提取紫花苜蓿叶片总RNA，PCR扩增Actin、PHYA和PHYB基因片段，将其克隆入pMD18-T载体进行测序。基于SYBRGreen Ⅰ双链嵌合染料建立检测紫花苜蓿PHYA和PHYB基因mRNA表达水平方法，对PCR产物的熔解曲线进行分析评价其特异性，经测序鉴定目的片段已插入pMDl8-T载体内，重组质粒的构建非常成功。为验证其准确性，我们检测紫花苜蓿WL-232 PHYA、PHYB mRNA表达量，结果证明：所建立的测定PHYA和PHYB基因mRNA水平的方法准确，适用于紫花苜蓿的各种组织的大量样本检测。