基因芯片法检测牛分支杆菌与结核分枝杆菌

摘要

本研究选取牛分枝杆菌pncA基因、结核分枝杆菌mpt40特异序列，作为基因芯片检测的靶片段，设计和筛选特异引物及探针.将标记的探针点至醛基化基片，制备基因芯片.采用引物不对称比例PCR技术扩增目的片段，然后将单链扩增产物与芯片杂交，杂交信号经扫描仪扫描后进行数据判读，并对采自不同牛场的5 36份临床样本进行检测. 实验结果表明：所建立的基因芯片方法能够同时对牛分支杆菌及结核分枝杆菌进行检测，其检测灵敏度为50fg(fivetubercle bacilli.).对临床常见其它的菌群无特异反应.临床样本检测中，检出牛分枝杆菌阳性样本16份，结核分枝杆菌阳性样本2份，混合感染样本4份.该方法的建立有望为进出境动物疫病快速、高通量基因芯片检测技术的建立奠定基础，具有广阔的应用前景.