Smac过表达增强镉对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制和促凋亡作用

摘要

目的：研究Smac过表达联合氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其相关机制。rn 方法：利用脂质体介导的方法将携带Smac基因的重组质粒pcDNA3.1+-hSmac转染入SMMC-7721，给予氯化镉处理后，采用MTT法检测Smac过表达联合氯化镉对细胞增殖的影响，AO／EB法和Annexin V／PI双荧光标记流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测细胞凋亡，Western blot法检测细胞中caspase-3、caspase-9和细胞色素c(cyt c)蛋白的表达。rn 结果：与对照组相比，除空载体pcDNA3.1+组无差异外，其余各组细胞A490值均降低，抑制率均明显增加，差异具有显著性(P<0.01～P<0.001)；单纯氯化镉组细胞抑制率随剂量增加而显著上升；分别与相应的单纯氯化镉组和pcDNA3.1+-hSmac组相比，氯化镉和Smac过表达联合组细胞的抑制率明显升高(P<0.001)。pcDNA3.1+-hSmac组、30 μ mol／L氯化镉组及氯化镉和Smac过表达联合组细胞出现凋亡形态学改变，且后者最为明显。FCM结果显示：pcDNA3.1+-hSmac组细胞凋亡增加，分别与对照组和pcDNA3.1+组相比，差异均具有显著性(P<0.001)。氯化镉和Smac过表达联合组细胞凋亡率最高，显著高于单纯30 μ mol／L氯化镉组(P<0.001)，且氯化镉和Smac过表达联合后，SMMC-/721细胞中caspase-3、caspase-9和cyt c明显增加，较单纯Smac过表达或30μ mol／L 氯化镉组高。rn 结论：氯化镉对SMMC-7721细胞具有毒性，可抑制细胞增殖，呈现剂量-效应关系，诱导细胞凋亡。Smac过表达可抑制SMMC-7721细胞增殖，诱导细胞凋亡，并可增强氯化镉对SMMC-7721细胞的增殖抑制和促凋亡作用，可能与细胞中caspase-3、-9和cytc的表达增加有关。