C-反应蛋白特异性肽段的LC-MS/MS分析

摘要

C反应蛋白(CRP)由5个相同球状的亚基以非共价键的形式组成，共206个氨基酸，相对分子质量为23048。CRP是众所周知的急性时相反应蛋白，可以反映体内炎症的情况。本研究采用CRP特异性肽段检测的方法来实现CRP的检测，旨在为同位素稀释质谱法定量测定CRP奠定基础。蛋白质的酶切效率是决定质谱检测结果的关键因素。酶解蛋白的水解度受酶底比、酶解时间、pH、底物质量浓度、酶解温度和试验误差(F)等因素影响。为获得比较理想的酶切产物，需要对酶解条件进行优化。本实验选择了胰蛋白酶常用的酶解酸度pH 8.0酶解温度37℃。但实验中发现，由于肽段结构不同等因素的影响，仪器在相同的分析参数条件下难以准确分出每一个肽离子峰的同位素峰，尤其是难以准确分出带3个或3个以上电荷离子的同位素峰，加上有时多电荷峰不成系列以及“杂峰”的干扰，导致解旋计算离子质量时常常出现较大的误差，从而使输入数据库的数据质量不好，影响最终的鉴定结果。所以实验时除了注意调校仪器的分辨率和准确性外，还应加大样品的酶解程度，以得到相对较小的(如相对分子质量500~1500)片段，这与本研究需要完全酶解CRP的实验目的相符。