参元丹后处理对体外心肌细胞缺血/再灌注模型细胞存活及凋亡率的影响

摘要

目的：建立离体培养乳鼠心肌细胞体外I／R模型，观察参元丹后处理对心肌细胞存活率及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法：体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞，建立体外心肌细胞I／R模型。参元丹含药血清：大鼠随机分为2组，分别给予参元丹0．048g·ml-1、1ml·100g-1及等量生理盐水，连续5d，最后一次给药后1h腹主动脉取血并分离血清，造模前将参元丹含药血清及空白血清分别稀释成5％参元丹含药血清、5％空白对照血清作为后处理药物。实验分：正常培养组、模型组、空白血清对照组、参元丹含药血清后处理组、参元丹含药血清后处理+LX294002组。形态学和免疫细胞化学方法鉴定心肌细胞，MTT比色法检测I／R心肌细胞存活率，Hoechst33342染色检测心肌细胞的早期凋亡率。结果：心肌细胞鉴定显示心肌细胞阳性率≥95％，保证了实验的真实性和可靠性。MTT比色法检测了I／R心肌细胞存活率，结果显示5％参元丹含药血清后处理能够有效提高UR心肌细胞存活率，其效果优于10％参元丹含药血清后处理。与正常培养组相比，模型组心肌细胞早期凋亡率增高(P<0．01)；与对照组及参元丹+LY组相比，参元丹组心肌细胞早期凋亡率降低(P<0．01)；对照组与参元丹+LY组之间，心肌细胞早期凋亡率无明显变化(P>0．05)。结论：参元丹含药血清后处理能够提高体外心肌I／R模型心肌细胞存活率，降低凋亡率；参元丹含药血清减少心肌I／R损伤与激活PI3K途径有关；参元丹胶囊可能存在临床治疗的最佳剂量。