建立以睾酮为探针的高效液相色谱方法测定CYP3A1酶活性

摘要

目的：建立以睾酮为探针测定SD大鼠CYP3A1酶活性的简便，稳定，快速，重复性好的高效液相方法。rn 方法：以咪达唑仑为内标，采用Hypersil C18分析柱（5μm，250×4.6 mm），以甲醇-10mMNa2HPO4水溶液（pH8.25）-（60：40，V/V）为流动相等梯度洗脱，在2 54nm波长、流速为1mL·min-1时检测样品。样品用乙酸乙酯萃取后，重溶进样，进样量为 20uL。rn 结果：在1.25~100ug·mL-1的范围内，6- β-羟基睾酮浓度与峰面积比的线性关系良好（r=0.9998），最低定量限为1.25ug·mL-1；6- β-羟基睾酮的萃取回收率为83.9%~87.4%， RSD ≤≤≤≤8.82%，相对回收率为100.4%~103.4%，RSD ≤≤≤≤7.05%；平均日内、日间RSD均小于10 %。样本萃取液放置24h以及样本室温放置4h，均稳定性良好。rn 结论：本实验所建立的高效液相方法简单稳定，重现性好，适用于体外测定睾酮及其代谢物6- β-羟基睾酮，也可用于体外评估CYP3A1酶活性以及相关酶动力学研究。