毕赤酵母表达RANKL-HBsAg作为治疗性骨质疏松症疫苗的研究

摘要

目的：用毕赤酵母表达的RANKL-HBsAg免疫小鼠，诱导其产生针对RANKL的中和抗体，考察免疫血清对于RANKL/ANK信号通路的阻断作用以及RANKL-HBsAg免疫后对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型症状的影响。方法：将RANKL融合于HBsAg基因片段的N端，用毕赤酵母胞内表达系统进行高拷贝数克隆的构建和表达。重组菌体诱导后，经过纯化，用纯化后样品对Balb／c小鼠进行免疫，检测其免疫血清中抗RANKL抗体生成情况。检测免疫血清对RANKL诱导RAW264.7细胞分化和增殖抑制作用的影响，以考察抗RANKL抗体的体外中和活性。用RANKL-HBsAg免疫OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型，通过测定和观察骨密度、骨力学参数和骨微结构等来评估RANKL-HBsAg对骨质疏松症的体内治疗效果。结果：构建完成了毕赤酵母重组RANKL-HBsAg高拷贝数表达菌株，并通过SDS-PAGE、ELISA、Western Blot电镜和N端测序等手段证实了RANKL-HBsAg得到正确表达并能自发形成病毒样颗粒。菌体样品经过一系列步骤的纯化获得了RANKL-HBsAg。通过对Balb／c小鼠进行免疫，证实RANKL-HBsAg能够诱导机体产生针对RANKL的抗体。免疫产生的抗RANKL抗体能够阻断RANKL诱导的RAW264.7细胞分化和增殖抑制现象。在OPG基因敲除小鼠的治疗实验中，免疫组的骨密度与对照组相比并无显著性差异，而在骨生物力学参数和骨微结构方面有所改善。结论：毕赤酵母重组表达的RANKL-HBsAg能够诱导机体产生抗RANKL抗体，所产生的抗体具有针对RANKL的中和活性，能够阻断RANKL／RANK通路。在对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型进行的治疗实验中，部分骨质疏松特征得到改善，其治疗效果还需进行进一步的评估。