膜反向斑点杂交技术快速检测耐利福平结核分枝杆菌的研究

摘要

目的:结核病是目前我国居民健康构成严重威胁的一类呼吸道传染病,具有较大的危害性,由于结核分枝杆菌生物学特性及目前较高耐药性的特点,给治疗构成了较大的困难,因此快速检测结核菌尤其是耐药结核菌的新方法显得尤其重要,本文通过反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性.rn 方法:根据结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因设计5条寡核普酸探针，并点在硝酸纤维素膜上，同时设计生物素标记的PCR引物扩增结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因片断，与膜探针进行反向杂交，并同细菌学药敏试验、PCR-SSCP方法进行比较。rn 结果:52株结核分枝杆菌临床分离株，经细菌学药敏试验其中32株耐利福平和20株敏感株，PCR-SSCP分析，结果20株敏感株的SSCP图谱与标准菌株完全一致，32株RFP耐药株有30株与标准株不同(93.75% )，膜反向斑点杂交结果显示20株敏感株20株均为阳性，特异性100%,32株耐药株中有3株未出现突变，敏感性90.6%。突变位点分别在:531,533位14株，526位10株，513位4，株516,519位1株，与PCR-SSCP分析结果符合率为96.7%.rn 结论:膜反向斑点杂交技术有可能成为检测结核分枝杆菌耐利福平基因的简便、快速的方法。