应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇基因型的研究

摘要

应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分支杆菌对乙胺丁醇(EMB)耐药性.设计与合成用于检测结核分支杆菌耐EMB基因embB的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分支杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交,并与PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)和PCR-直接测序(PCR-DS)结果比较.对81株结核分支杆菌临床分离株进行分析,31株EMB敏感株中,26株embB基因的SSCP图谱、膜反向斑点杂交结果与标准株(H37Rv)完全相同;其余5株SSCP图谱出现泳动变位,其中3株E1b杂交阳性,PCR-DS分析为embB基因306位密码子ATG→GTG突变;2株E1d杂交阳性,PCR-DS分析为embB基因306位密码子ATG→ATA突变.50株耐EMB菌株中,24株PCR-SSCP 图谱与标准菌株相同,E1杂交阳性;26株PCR-SSCP图谱出现泳动变位,其中18株E1b杂交阳性,2株E1c杂交阳性,5株E1d杂交阳性,1株E1e杂交阳性,未发现E1f杂交阳性,与PCR-SSCP、PCR-DS分析结果一致.突变检出率为52%.膜反向斑点杂交技术可能成为检测部分结核分支杆菌乙胺丁醇耐药基因型简便、快速的方法.