灰树花多糖

摘要： 采用碱提法,并以DEAE Sepharose Fast Flow离子柱层析和Sephacryl S-500 HR凝胶柱层析从灰树花(Grifola frondose)子实体中分离纯化得到水溶性多糖GFPN-2-A,通过高效尺寸排阻色谱-多角度激光散射-示差联用(high-performance size exclusion chromatography-multi-angle laser scattering-refractive index,HPSEC-MALLS-RI)、HPLC、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)、扫描电子显微镜、原子力显微镜、刚果红实验和比色法等对其进行结构表征及精氨酸酶抑制活性分析。结果表明,GFPN-2-A是分子质量为4.56×106 Da的β构型多糖,主要由葡萄糖以及少量的葡萄糖醛酸、甘露糖、核糖和半乳糖组成,物质的量比为54∶1∶0.51∶0.37∶0.68,其主要为碎屑状和片状,在水溶液中的构象呈现出圆柱和圆锥的块状特征,不含三螺旋结构。GFPN-2-A能够抑制精氨酸酶的活性,IC 50为(0.855±0.64)mg/mL。动力学分析表明,GFPN-2-A对精氨酸酶的抑制为竞争性可逆抑制,抑制常数K i为0.284 mg/mL。该研究首次证明了灰树花多糖对精氨酸酶具有抑制作用,为灰树花多糖药物开发开辟新的药物靶点提供了理论依据。

摘要： 目的 探讨灰树花多糖对宫颈癌Caski细胞增殖、凋亡、侵袭迁移及PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的影响.方法 50、100、200 μg/mL灰树花多糖处理Caski细胞48 h,通过MTT比色法、Transwell小室及Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖、侵袭迁移及凋亡率,Western blot检测AKT、p-AKT、PCNA(增殖细胞核抗原)、Cleaved caspase-3(裂解的半胱天冬酶3)和E-cadherin蛋白(上皮钙黏蛋白)表达.使用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002(10 μmol/L)单独或联合灰树花多糖(10 μmol/L LY294002和200 μg/mL灰树花多糖)处理Caski细胞48 h,检测各组细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及AKT、p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达.结果 随着灰树花多糖质量浓度增加细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT和PCNA表达降低,Cleaved caspase-3和E-cadherin表达升高(P＜0.05).LY294002可增强灰树花多糖对Caski细胞增殖、侵袭迁移、凋亡及p-AKT、PCNA、Cleaved caspase-3和E-cadherin表达的影响.结论 灰树花多糖可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡.

摘要： 以灰树花干物质为原料,通过响应面Box-Behnken法优化复合酶协同微波辅助提取多糖工艺,采用sevage法去蛋白、001×7大孔树脂脱色,并对DEAE-52纤维素层析柱分离的组分进行抗氧化性研究.响应面试验结果显示,灰树花多糖最佳提取工艺条件为:在微波时间7 min、料水比1∶27(g/mL)、酶配比1∶1(质量比)、酶料比0.02 g/g条件下,灰树花多糖提取量为73.25 mg/g,与预测值的相对偏差为3.17％.采用纯水和0.05mol/LNaCl对DEAE-52纤维素层析柱进行洗脱得到两种灰树花多糖(Grifola frondosa polysaccharide,GFP)GFP1、GFP2.体外抗氧化试验表明:GFP1、GFP2浓度为6 mg/mL时,还原力达到043和0.48;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-dipheny1-2-picryl-hydrazyl,DPPH)自由基清除率最高分别为33.54％和50.38％、对羟自由基清除率最高分别为81.59％和90.21％、对超氧阴离子自由基清除率最高分别为79.23％和87.23％,GFP2相较GFP1具有更好的抗氧化能力.

摘要： 通过查阅近十几年的国内外相关文献得出,灰树花的研究主要集中于灰树花多糖。综述灰树花多糖的提取工艺、预处理方法、分离纯化手段、结构分析及抗肿瘤、免疫调节、抗病毒、抗氧化、降血糖、降血脂等多种药理活性。

摘要： 目的 观察灰树花多糖(PGF)协同顺铂对H22腹水瘤小鼠的影响.方法 将建模后的80只小鼠随机分为4组,以PGF、顺铂和两者联合分别对小鼠用药.测量小鼠腹水量;记载小鼠生存时间;观察腹水细胞形态变化;检测小鼠腹膜渗透性;流式检测细胞凋亡率.结果 与对照组比较,联合组、PGF组及顺铂组均能减少小鼠的腹水量、延长小鼠生存期,提高细胞凋亡率(均P<0. 05),且联合组作用优于PGF组及顺铂组(P<0. 05,P<0. 01).与对照组及顺铂组比较,PGF组及联合组均能显著降低小鼠腹膜渗透性(均P<0. 05).结论 PGF与顺铂联合应用对H22小鼠腹水瘤具有显著抑制作用.

摘要： 目的 观察灰树花多糖及其复合多糖对肺纤维化大鼠肺脏损害的作用.方法 用气管内注入博来霉素制作大鼠肺纤维化模型,给予灰树花多糖及其复合多糖提前干预,观察大鼠死亡率、生存状态、体重等指标,HE染色后进行Aschcroft评分观察肺脏损伤程度,Masson染色观察肺脏纤维化程度,免疫荧光染色后观察纤维化相关蛋白:波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况,从而观察灰树花多糖及其复合多糖对肺纤维化大鼠肺脏损害的作用.结果 造模前期,灰树花多糖组大鼠死亡率明显低于模型组,但在第6周灰树花多糖组大批死亡,总死亡率与模型组相比较无变化,复合多糖组死亡率与对模型组相比较无明显变化.灰树花多糖组较对照组早期动物状态好,但体重、Aschcroft评分、波形蛋白及α-SMA检测与模型组相比较均无明显变化(P>0.05).结论 灰树花多糖及其复合多糖可以改善肺纤维化大鼠的生存状态,但未降低其死亡率,不建议在治疗肺纤维化的过程中单独使用.

摘要： 目的:研究灰树花多糖(GFP)对TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞炎症因子分泌的影响.方法:采用TNF-α/IFN-γ诱导HaCaT细胞炎症模型,以不同浓度的GFP(0.2 mg/mL、0.4 mg/mL和0.8 mg/mL)进行干预.分别采用qPCR和ELISA技术检测HaCaT细胞TARC、MDC、IL-6和TNF-αmRNA及蛋白的表达水平,采用Western blot技术检测NF-κB和p-NF-κB表达水平.结果:GFP对HaCaT细胞炎性模型中TARC、MDC、IL-6、TNF-αmRNA和TARC、MDC蛋白及p-NF-κB的表达均有明显的抑制作用.结论:GFP具有明显的抗炎作用,其机制可能与调节NF-κB P65信号通路有关.

摘要： 灰树花是一种药食两用真菌,灰树花多糖是其主要生物活性成分,具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节和抗乙型肝炎病毒等功效,近年来一直是药用真菌研究的热点.目前,多糖结构特点与生物活性之间的关系尚未明确.因此,该文基于灰树花多糖结构特征和生物活性最新的研究现状,对多糖分子进行分子质量、结构与活性之间关系的探讨,并对灰树花多糖的应用前景进行展望,旨在为灰树花多糖的开发利用提供一定的参考价值.

摘要： 探究低温提取的灰树花多糖的结构及其体外抗肿瘤活性.利用低温(4°C)水提醇沉法提取灰树花粗多糖,采用Sevage法除去粗糖中的蛋白,透析除去盐类、寡糖等小分子物质,得到多糖组分命名为GFP,其得率为2.13％;离子色谱检测其主要单糖为葡萄糖、半乳糖和甘露糖;高效液相色谱分析结果表明GFP为混合物,含有两个主要的大分子群体,分子量分别为1700.00ku和34.12ku,其组分峰面积分别为66.57％和28.23％;红外光谱显示GFP可能为α-吡喃多糖.GFP的抗肿瘤活性研究表明:在一定的浓度范围内,GFP能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖;通过JC-1染色检测线粒体膜电势的变化发现GFP会引起线粒体膜电位降低,这说明GFP诱导的细胞凋亡伴随着膜电位的改变;经过GFP处理的HepG2细胞出现了典型的细胞凋亡的形态变化,细胞收缩,形成微核.以上均说明GFP诱导HepG2细胞凋亡.

摘要： To investigate influence ofMaitake Polysaccharide(MP) on expression and replication of HBV in HepG2.2.15 cell.MP from fresh Maitake fruiting bodies was extracted by water.The cell growth inhibition rate of HepG2.2.15 cells was detected by MTT assay in 4,2,1,0.5,0.25 mg/mL concentration respectively and the half cell toxicity concentration (CC50) was calculated.HepG2.2.15 cells were treated by MP with different concentration or 0.1 mg/mL lamivudine,and the Hepatitis B surface antigen and e antigen (HBsAg and HBeAg) in cell supernatant were evaluated by enzyme-linked immunoassay assay (ELISA),HBV DNA contents after cells were treated 9 days were detected using quantitative PCR method.Then each inhibition rate,the half inhibition concentration (IC50) and the therapeutic index (TI50) were calculated respectively based on the data.The CC50 of MP treated to HepG2.2.15 cells is 5.154 mg/mL.The inhibition rate of MP in HBsAg,HBeAg and of HBV DNA are dose dependent and the IC50 are 4.814,0.806,0.621 mg/mL,TI50 are 1.071,6.398 and8.306 respectively.MP has strong inhibitory effect on HBV replication and expression in vitro.%用水提取法从新鲜灰树花子实体中提取灰树花多糖(Maitake Polysaccharide,MP),分别以不同质量浓度MP作用于HepG2.2.15细胞,MTT法测定细胞生长抑制率,计算半数细胞毒性浓度(CC50).另以不同质量浓度的MP和0.1 mg/mL拉米夫定处理HepG2.2.15细胞,采用酶联免疫法(ELISA法)检测分别处理3、6、9d的细胞培养上清液中乙肝表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)滴度,用荧光定量PCR法检测处理9d后的细胞培养上清液中HBV DNA拷贝数,分别计算对HBsAg、HBeAg和HBV DNA的抑制率和半数抑制质量浓度(IC50)及治疗指数(TI50).结果表明,MP对HepG2.2.15细胞的CC50为5.154 mg/mL.对HBsAg、HBeAg及HBV DNA的抑制率呈剂量依赖性,给药9d后的IC50分别是4.814、0.806、0.621 mg/mL.TI50分别为HBsAg1.071,HBeAg 6.398和HBV DNA 8.306.因此MP具有低毒特点并对体外培养的HBV复制和表达具有较明显的抑制作用.

摘要： 采用超临界CO2流体提取技术对灰树花多糖进行了提取工艺研究,以确定其最佳提取参数.以灰树花多糖为评价指标,采用正交试验法对超临界提取压力、提取时间、夹带剂等工艺参数进行系统的探索.发现最佳提取工艺条件为:提取压力30MPa,夹带剂40％乙醇,提取温度45°C,多糖的得率和提取率分别为6.83％,53.18％.夹带剂浓度对灰树花多糖的超临界CO2提取工艺有显著性影响.该法与传统方法相比,多糖纯度提高了一倍,并易于保留多糖的生物活性.

摘要： 目的：考察高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定灰树花多糖(GFP)相对分子质量(Mr)的影响因素。方法：采用HPGPC法分别以不同的色谱柱、流动相、盐浓度、pH值、上样浓度、上样体积和检测温度测定GFP的Mr，并对测定结果进行分析。结果：采用TSK G4000PWxl和Shodex OHpak SB-804HQ色谱柱的Mr测定结果相差12.06%；分别以纯水、0.02%NaN3、0.1mol·L-1NaNO3和0.1mol·L-1Na2SO4溶液为流动相进行测定，GFP的Mr依次为822410、177520、29112和25066道尔顿；在0-0.025mol/L氯化钠溶液中Mr先急剧降低，然后随着盐浓度的增加，在0.1-0.2mol/L氯化钠溶液中趋于平稳; 在pH 3-6时，Mr随pH增加而急剧增加，在pH 6-9范围内变化较小，当pH为10时又稍微增加；上样浓度在0.5～10mg·mL-1的范围内GFP的Mr测定结果相差8.33%；在上样体积为5～30μL范围内相差8.65%；在温度为30～45°C范围内相差7.26%。结论：流动相、盐浓度、pH值对GFP的Mr测定结果有很大的影响，色谱柱、上样浓度、上样体积和测定温度对Mr测定结果有明显影响。

摘要： 对灰树花发酵工艺的主要因子通气量和pH值进行优化试验，以菌丝生物量为响应值，建立了响应面方程y=-1.5211+0.5968X1+0.6175X2-0.1278X12-0.0495X22，应用RBF神经网络的方法，对菌丝生物量进行了拟合，经过网络学习和训练，效果也较理想，与回归法相近。还探讨了灰树花多糖制剂对小鼠的免疫调节作用。分别用灰树花多糖制剂的剂量为0.13g、0.27g、0.81g和水为对照共4组处理，经灌胃考察免疫调节的作用。结果表明，超过0.27g的剂量时，可以提高小鼠的足跖肿胀度，抗体细胞生成数，有很好的免疫调节作用。

摘要： 本发明涉及一种灰树花液体深层发酵培养及其多糖的提取以及多糖的应用，所述灰树花液体深层发酵培养工艺利用发酵培养液A与发酵培养液C对灰树花菌种进行发酵培养，所述发酵培养液A为双孢蘑菇罐藏加工废水依次经浓缩、醇沉、过滤收集滤液、滤液浓缩至滤液中可溶性固形物浓度达3％‑4％后所得的溶液；所述发酵培养液C为发酵培养液A与发酵培养液B按体积比为20:1‑30:1混合后所得的混合液；所述发酵培养液B为双孢蘑菇罐藏加工废水依次经浓缩、醇沉、过滤收集沉淀、沉淀溶于水形成的折光率达35～40％的溶液。本发明利用双孢蘑菇罐藏加工废水作为灰树花液体深层发酵培养的培养基来源，将双孢蘑菇罐藏加工废水变废为宝。

摘要： 本发明属于医药生物技术领域，具体涉及灰树花及灰树花多糖肽在促进体内汞排出上的应用。本发明研究发现，灰树花具有促进体内汞排出的作用，对于促进体内汞排出的药物、食品、保健品的开发和应用具有广泛的应用价值。相对于灰树花子实体和发酵菌丝体，灰树花多糖肽具有更好地促进大鼠体内汞排出的作用。

摘要： 本发明公开一种灰树花多糖产品中具有生物活性的水溶性多糖含量的测定方法，其方法包括脂溶性成分除去，可溶性糖类干扰物质除去，硫酸-苯酚法测定活性多糖含量等步骤。本发明的方法具有可操作性强、测定结果稳定可靠、测定结果的变异系数小、误差小、重现性高等优点。

摘要： 本发明公开了一种灰树花多糖产生菌及灰树花多糖制备方法，灰树花多糖产生菌（Griflola frondosa）菌株AHSW GF‑001，保藏编号为CGMCC No.14548。采用本发明得到的灰树花多糖的含量在65%左右，灰树花多糖的产量达到3.29g/l。

摘要： 本发明公开了一种利用诱变产生的灰树花菌株生产灰树花多糖的方法，涉及食品微生物应用技术领域。通过紫外诱变获得一株灰树花新菌株，保藏编号为CCTCC NO:M 2018907，在检验符合污染物限量标准的米糠麸皮全料培养基进行液态发酵，高效转化米糠麸皮为灰树花菌丝体原料和更多的胞外粗多糖。发酵产物经多频超声提取、冷冻浓缩、柠檬酸浸提置换重金属离子、醇沉醇洗除杂得到合格的灰树花多糖产物。本发明首次实现灰树花新菌株生产灰树花多糖的方法，同时本发明将低值的米糠麸皮转化成高值的具有多种保健功能的灰树花多糖，对降低生产成本、低端资源高效合理高值化利用、保护大众健康，都具有有益的社会和经济效果。

摘要： 本发明属于医药生物技术领域，具体涉及灰树花及灰树花多糖肽在促进体内汞排出上的应用。本发明研究发现，灰树花具有促进体内汞排出的作用，对于促进体内汞排出的药物、食品、保健品的开发和应用具有广泛的应用价值。相对于灰树花子实体和发酵菌丝体，灰树花多糖肽具有更好地促进大鼠体内汞排出的作用。

摘要： 本发明涉及一种基于膜过滤技术提取灰树花活性多糖的方法及该方法提取得到的灰树花活性多糖和用途，包括：(1)向灰树花子实体原料中加入水；合并，真空浓缩得到灰树花提取浓缩液；(2)将灰树花提取浓缩液微滤预处理；(3)将微滤透过液超滤处理；(4)将超滤截留液干燥，得到灰树花多糖。本发明具有有益效果：(1)最大限度防止破坏灰树花提取液中活性成分，同时分离过程相当于一次预浓缩；本发明的超滤技术非常适合分离提取液中的有效成分，而去除与功效性较差、甚至无效的成分，所制备的灰树花多糖纯度高于传统工艺制备多糖；提高超滤效果，减轻膜污染，有利于提高生产效率，延长超滤膜使用寿命，节省成本；适用于工业化，经济前景好。

摘要： 本发明公开的一种灰树花水提多糖和碱提多糖分离纯化的方法，其具体步骤包括：1）灰树花子实体原料浸泡脱脂，离心得到一次固相物和一次提取液；2）一次固相物进行沸水冷凝回流浸提，离心得到二次固相物和二次提取液；3）二次提取液水提得灰树花水提多糖；4）二次固相物进行浸提后固液分离，得到三次提取液；5）三次提取液碱提得灰树花碱提多糖；采用本发明对灰树花子实体进行多糖提取，结合了水提和碱提两种提取方式，综合提取灰树花多糖，可以综合提高灰树花多糖的提取率，提取率达到现有提取率的122%，同时大幅度降低了原料的浪费，是一种高利用率、高提取率的灰树花多糖分离纯化的方法，适合大范围推广。

摘要： 本发明公开一种灰树花多糖产品中具有生物活性的水溶性多糖含量的测定方法，其方法包括脂溶性成分除去，可溶性糖类干扰物质除去，硫酸－苯酚法测定活性多糖含量等步骤。本发明的方法具有可操作性强、测定结果稳定可靠、测定结果的变异系数小、误差小、重现性高等优点。

摘要： 本发明公开了一种提高灰树花多糖提取率及生物活性的方法，包括以下步骤：向灰树花粉末和去离子水组成的溶液中加入过氧化氢和抗坏血酸进行反应；所得反应液浓缩后加入无水乙醇，所得沉淀中加入去离子水进行复溶，获得粗多糖溶液；将所得的粗多糖溶液进行冷冻干燥，得到灰树花降解粗多糖(DGFP)。本发明所得到的灰树花降解粗多糖(DGFP)的体外抗氧化活性高。