基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒及其应用

摘要

本发明属生物技术和基因工程技术领域，具体涉及一种基于Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶的基因克隆质粒(pBCFX+和pBCFX-)及其应用。该质粒使用含有Phi BT1整合酶及PhiC整合酶对应attP位点串连序列的中间插入LacZ表达框架作为质粒载体(pBCFX+和pBCFX-)置换克隆位点，采用插入失活作蓝白筛选。基于该质粒的克隆方法主要包括使用Phi BT1整合酶及Phi C31整合酶混合物作为定点整合催化酶，插入DNA片段依据目的要求可以通过PCR等技术在两侧附加对应的attB序列，从而决定插入片段方向性。该克隆系可以方便操作含有特别内切酶位点的插入DNA，在大片段基因操作方面有独到优因为该体系不需要限制性酶，磷酸酶和连接酶操作，可以简化重组DNA操作方法。基因工程中有广泛应用前景。