一种能降低溶血率的红细胞保存液及制备方法

摘要

本发明提供了一种能降低溶血率的红细胞保存液，一种能降低溶血率的红细胞保存液，包括枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚，所述营养液包括葡萄糖、甘露糖、果糖、酪氨酸和精氨酸，所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠4.3g/L、纤维蛋白降解物2.6g/L、腺嘌呤3.5g/L、磷酸钠8.6g/L、营养液12.7g/L、山梨糖醇1.9g/L、安氯西林钠1.1g/L、维生素E0.35g/L、茶多酚1.8g/L。通过加入纤维蛋白降解物能增强红细胞的抗凝作用，降低溶血率，而通过加入维生素E和茶多酚，能降低红细胞的氧化作用，提高红细胞的保存时间。

说明书

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，尤其涉及一种能降低溶血率的红细胞保存液及制备方法。

背景技术

红细胞也称红血球，是血液中数量最多的一种血细胞，同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介，同时还具有免疫功能，哺乳动物成熟的红细胞是无核的，这意味着它们失去了DNA，红细胞也没有线粒体，它们通过分解葡萄糖释放能量，在现代医学中，输血时常见的一种辅助治疗手段，而能长时间地保存红细胞液成了一项非常重要的技术。

现在已经开发出了很多红细胞保存液，经过我们大量的检索与参考，发现现有的保存液有如公开号为KR101435786B1，KR101000785B1和KR101543306B1所公开的保存液，所述红细胞保存液的组成和含量如下：腺嘌呤0.3～0.5g/L，葡萄糖25～35g/L，柠檬酸钠6～10g/L，肌苷0.2～0.4g/L，氯霉素0.2～0.3g/L，硫酸新霉素0.08～0.12g/L，氯化钠2.5～3.5g/L，磷酸二氢钠0.04～0.06g/L。但该红细胞保存液的红细胞溶血率还有待降低，延长红细胞的保存期。

发明内容

本发明的目的在于，针对所存在的不足，提出了一种能降低溶血率的红细胞保存液及制备方法。

为了克服现有技术的不足，本发明采用如下技术方案：

一种能降低溶血率的红细胞保存液，包括枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚；

进一步的，所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠3.6~5.2g/L、纤维蛋白降解物2.4~3.4g/L、腺嘌呤2.8~4.0g/L、磷酸钠6.8~10.3g/L、营养液11.2~15.8g/L、山梨糖醇1.4~2.5g/L、安氯西林钠0.8~1.2g/L、维生素E0.28~0.46g/L、茶多酚0.6~2.4g/L；

进一步的，所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠4.3g/L、纤维蛋白降解物2.6g/L、腺嘌呤3.5g/L、磷酸钠8.6g/L、营养液12.7g/L、山梨糖醇1.9g/L、安氯西林钠1.1g/L、维生素E0.35g/L、茶多酚1.8g/L；

进一步的，所述营养液包括葡萄糖、甘露糖、果糖、酪氨酸和精氨酸；

进一步的，所述营养液中各物质的重量配比为葡萄糖8份、甘露糖5份、果糖12份、酪氨酸3份和精氨酸4份；

进一步的，所述保存液的渗透压为280~320mmol/L，所述保存液的PH值为7.9；

制备一种红细胞保存液的方法，包括以下步骤：

步骤一：配置纤维蛋白降解物溶液；

S1、将血浆与水混合并进行水浴，完全溶解后加入凝血酶，充分搅拌后静置20分钟产生沉淀，使用缓冲液多次过滤得到交联纤维蛋白；

S2、将上述过程得到的交联纤维蛋白加入到降解缓冲液中，在往混合液中添加纤溶酶进行降解20分钟；

S3、将降解后的混合液进行离心操作，取得上清液后进行蒸发，直至刚出现沉淀后停止蒸发并添加1ml水，在-10℃环境中保存降解物溶液；

步骤二：按权利要求3中的比例量取枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚并溶于水中，搅拌混合均匀后将所述溶液的PH值调整至7.9，添加氯化钠使所述溶液的渗透压调整为300mmol/L，对所得到的细胞保存液进行封装保存。

本发明所取得的有益效果是：

本发明通过加入纤维蛋白降解物能增强红细胞的抗凝作用，降低溶血率，而通过加入维生素E和茶多酚，能降低红细胞的氧化作用，提高红细胞的保存时间。

附图说明

从以下结合附图的描述可以进一步理解本发明。图中的部件不一定按比例绘制，而是将重点放在示出实施例的原理上。在不同的视图中，相同的附图标记指定对应的部分。

图1为游离血红蛋白浓度对比实验数据示意图。

图2为红细胞保存液配置流程示意图。

图3为纤维蛋白降解物溶液配置流程示意图。

图4为红细胞液配置流程示意图。

图5为水浴装置结构示意图。

图6为溶血率对比曲线示意图。

图7为部分测试液过柱法提取检测结果示意图。

图8为部分测试液过柱法提取检测结果示意图。

具体实施方式

为了使得本发明的目的.技术方案及优点更加清楚明白，以下结合其实施例，对本发明进行进一步详细说明；应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。对于本领域技术人员而言，在查阅以下详细描述之后，本实施例的其它系统.方法和/或特征将变得显而易见。旨在所有此类附加的系统.方法.特征和优点都包括在本说明书内.包括在本发明的范围内，并且受所附权利要求书的保护。在以下详细描述描述了所公开的实施例的另外的特征，并且这些特征根据以下将详细描述将是显而易见的。

本发明实施例的附图中相同或相似的标号对应相同或相似的部件；在本发明的描述中，需要理解的是，若有术语“上”、“下”、“左”、“右”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或组件必须具有特定的方位，以特定的方位构造和操作，因此附图中描述位置关系的用语仅用于示例性说明，不能理解为对本专利的限制，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语的具体含义。

实施例一。

一种能降低溶血率的红细胞保存液，包括枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚；

所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠3.6~5.2g/L、纤维蛋白降解物2.4~3.4g/L、腺嘌呤2.8~4.0g/L、磷酸钠6.8~10.3g/L、营养液11.2~15.8g/L、山梨糖醇1.4~2.5g/L、安氯西林钠0.8~1.2g/L、维生素E0.28~0.46g/L、茶多酚0.6~2.4g/L；

所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠4.3g/L、纤维蛋白降解物2.6g/L、腺嘌呤3.5g/L、磷酸钠8.6g/L、营养液12.7g/L、山梨糖醇1.9g/L、安氯西林钠1.1g/L、维生素E0.35g/L、茶多酚1.8g/L；

所述营养液包括葡萄糖、甘露糖、果糖、酪氨酸和精氨酸；

所述营养液中各物质的重量配比为葡萄糖8份、甘露糖5份、果糖12份、酪氨酸3份和精氨酸4份；

所述保存液的渗透压为280~320mmol/L，所述保存液的PH值为7.9。

实施例二。

一种能降低溶血率的红细胞保存液，包括枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚；

所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠3.6~5.2g/L、纤维蛋白降解物2.4~3.4g/L、腺嘌呤2.8~4.0g/L、磷酸钠6.8~10.3g/L、营养液11.2~15.8g/L、山梨糖醇1.4~2.5g/L、安氯西林钠0.8~1.2g/L、维生素E0.28~0.46g/L、茶多酚0.6~2.4g/L；

所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠4.3g/L、纤维蛋白降解物2.6g/L、腺嘌呤3.5g/L、磷酸钠8.6g/L、营养液12.7g/L、山梨糖醇1.9g/L、安氯西林钠1.1g/L、维生素E0.35g/L、茶多酚1.8g/L；

所述营养液包括葡萄糖、甘露糖、果糖、酪氨酸和精氨酸；

所述营养液中各物质的重量配比为葡萄糖8份、甘露糖5份、果糖12份、酪氨酸3份和精氨酸4份；

所述保存液的渗透压为280~320mmol/L，所述保存液的PH值为7.9；

制备一种红细胞保存液的方法，包括以下步骤：

步骤一：配置纤维蛋白降解物溶液；

S1、将血浆与水混合并进行水浴，完全溶解后加入凝血酶，充分搅拌后静置20分钟产生沉淀，使用缓冲液多次过滤得到交联纤维蛋白；

S2、将上述过程得到的交联纤维蛋白加入到降解缓冲液中，在往混合液中添加纤溶酶进行降解20分钟；

S3、将降解后的混合液进行离心操作，取得上清液后进行蒸发，直至刚出现沉淀后停止蒸发并添加1ml水，在-10℃环境中保存降解物溶液；

步骤二：按权利要求3中的比例量取枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚并溶于水中，搅拌混合均匀后将所述溶液的PH值调整至7.9，添加氯化钠使所述溶液的渗透压调整为300mmol/L，对所得到的细胞保存液进行封装保存。

本实施例通过溶血率对比实验和抗体抗性对比实验来比较本发明的红细胞保存液与普通红细胞保存液的效果区别，在对比实验开始前先制备红细胞溶液；

红细胞液的制备：

获取健康的血液，加入等量的氧化钠注射液，通过离心机在2500rpm强度下离心5分钟，获取其中的沉淀物质后再加入与之前等量的氧化钠注射液，通过离心机在2500rpm强度下离心5分钟，重复此操作3遍，将最终得到的沉淀平均分成2份，分别加入到本发明的红细胞保存液中形成测试液A和普通的红细胞保存液中形成测试液B，置于4℃环境温度下保存；

溶血率对比实验：

红细胞主要由红细胞膜和大量的血红蛋白组成，当红细胞膜破裂时，膜表面抗原被破坏，血红蛋白逸出，发生溶血现象，所以游离血红蛋白浓度可以作为红细胞溶血率的体现；

将0.3g邻甲联苯胺溶于40ml冰乙酸中，再添加蒸馏水至75ml，配置成0.4%的邻甲联苯胺溶液，并置于4℃环境下保存，取15ml冰乙酸溶液，添加蒸馏水至100ml，配置成15%的冰乙酸溶液，取2g牛血红蛋白溶于100ml生理盐水中，配置成20g/L的血红蛋白液，使用时取出1ml血红蛋白液，添加蒸馏水至100ml；

取三支试管，分别加入测试液A1ml、测试液B1ml和血红蛋白标准液1ml，再向上述三支试管中加入0.4%的邻甲联苯胺溶液5ml和2%的过氧化氢溶液5ml，混合后静置5分钟，再加入15%的冰乙酸溶液20ml，每隔两周时间进行游离血红蛋白浓度的测定检测结果如图1所示，从表中可以看出，本发明的红细胞保存液对红细胞的保存期可以长达20周，比普通的红细胞保存液的保存期长；

抗体抗性对比实验：

取8支试管，前四支试管中分别加入测试液A10ml，后四支试管中分别加入测试液B10ml，在装有测试液A的四支试管中分别加入抗A、抗B、抗D、和抗H抗体，在装有测试液B的四支试管中分别加入抗A、抗B、抗D、和抗H抗体，将8支试管通过离心机在2000rpm强度下离心2分钟，观察凝集效果，对比观察8支试管的颜色深度，发现装有测试液B的试管的颜色深度比对应的装有测试液A的试管的颜色深，说明本发明的红细胞保护液中红细胞的凝集效果弱，稳定性更强。

获取等量的测试液A25份，分别编号1-25号，使用过柱法提取方法检测其在不同温度下的色度，部分检测结果如图7和图8所示。

实施例三。

一种能降低溶血率的红细胞保存液，包括枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚；

所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠3.6~5.2g/L、纤维蛋白降解物2.4~3.4g/L、腺嘌呤2.8~4.0g/L、磷酸钠6.8~10.3g/L、营养液11.2~15.8g/L、山梨糖醇1.4~2.5g/L、安氯西林钠0.8~1.2g/L、维生素E0.28~0.46g/L、茶多酚0.6~2.4g/L；

所述保存液中各物质的含量为：枸橼酸三钠4.3g/L、纤维蛋白降解物2.6g/L、腺嘌呤3.5g/L、磷酸钠8.6g/L、营养液12.7g/L、山梨糖醇1.9g/L、安氯西林钠1.1g/L、维生素E0.35g/L、茶多酚1.8g/L；

所述营养液包括葡萄糖、甘露糖、果糖、酪氨酸和精氨酸；

所述营养液中各物质的重量配比为葡萄糖8份、甘露糖5份、果糖12份、酪氨酸3份和精氨酸4份；

所述保存液的渗透压为280~320mmol/L，所述保存液的PH值为7.9；

制备一种红细胞保存液的方法，包括以下步骤：

步骤一：配置纤维蛋白降解物溶液；

S1、将血浆与水混合并进行水浴，完全溶解后加入凝血酶，充分搅拌后静置20分钟产生沉淀，使用缓冲液多次过滤得到交联纤维蛋白；

S2、将上述过程得到的交联纤维蛋白加入到降解缓冲液中，在往混合液中添加纤溶酶进行降解20分钟；

S3、将降解后的混合液进行离心操作，取得上清液后进行蒸发，直至刚出现沉淀后停止蒸发并添加1ml水，在-10℃环境中保存降解物溶液；

步骤二：按权利要求3中的比例量取枸橼酸三钠、纤维蛋白降解物、腺嘌呤、磷酸钠、营养液、山梨糖醇、安氯西林钠、维生素E和茶多酚并溶于水中，搅拌混合均匀后将所述溶液的PH值调整至7.9，添加氯化钠使所述溶液的渗透压调整为300mmol/L，对所得到的细胞保存液进行封装保存。

本实施例通过溶血率对比实验和抗体抗性对比实验来比较本发明的红细胞保存液与普通红细胞保存液的效果区别，在对比实验开始前先制备红细胞溶液；

红细胞液的制备：

获取健康的血液，加入等量的氧化钠注射液，通过离心机在2500rpm强度下离心5分钟，获取其中的沉淀物质后再加入与之前等量的氧化钠注射液，通过离心机在2500rpm强度下离心5分钟，重复此操作3遍，将最终得到的沉淀平均分成2份，分别加入到本发明的红细胞保存液中形成测试液A和普通的红细胞保存液中形成测试液B，置于4℃环境温度下保存；

溶血率对比实验：

红细胞主要由红细胞膜和大量的血红蛋白组成，当红细胞膜破裂时，膜表面抗原被破坏，血红蛋白逸出，发生溶血现象，所以游离血红蛋白浓度可以作为红细胞溶血率的体现；

将0.3g邻甲联苯胺溶于40ml冰乙酸中，再添加蒸馏水至75ml，配置成0.4%的邻甲联苯胺溶液，并置于4℃环境下保存，取15ml冰乙酸溶液，添加蒸馏水至100ml，配置成15%的冰乙酸溶液，取2g牛血红蛋白溶于100ml生理盐水中，配置成20g/L的血红蛋白液，使用时取出1ml血红蛋白液，添加蒸馏水至100ml；

取三支试管，分别加入测试液A1ml、测试液B1ml和血红蛋白标准液1ml，再向上述三支试管中加入0.4%的邻甲联苯胺溶液5ml和2%的过氧化氢溶液5ml，混合后静置5分钟，再加入15%的冰乙酸溶液20ml，每隔两周时间进行游离血红蛋白浓度的测定检测结果如图1所示，从表中可以看出，本发明的红细胞保存液对红细胞的保存期可以长达20周，比普通的红细胞保存液的保存期长；

抗体抗性对比实验：

取8支试管，前四支试管中分别加入测试液A10ml，后四支试管中分别加入测试液B10ml，在装有测试液A的四支试管中分别加入抗A、抗B、抗D、和抗H抗体，在装有测试液B的四支试管中分别加入抗A、抗B、抗D、和抗H抗体，将8支试管通过离心机在2000rpm强度下离心2分钟，观察凝集效果，对比观察8支试管的颜色深度，发现装有测试液B的试管的颜色深度比对应的装有测试液A的试管的颜色深，说明本发明的红细胞保护液中红细胞的凝集效果弱，稳定性更强；

在制备纤维蛋白降解物时使用的一种智能水浴装置，包括箱体、储水箱和加热锅，所述储水箱和所述加热锅位于所述箱体内部，所述储水箱和所述加热锅相互毗邻，所述储水箱的底部略高于所述加热锅的中部，所述储水箱的下部设有出水管，所述出水管连通至所述加热锅，通过控制所述出水管上的开关能让所述储水箱中的水流入到所述加热锅中，所述加热锅内设有一层定位板，所述定位板上设有若干个定位孔，所述定位孔的上端设有定位机构，所述定位机构包括呈环形的第一定位环和第二定位环，所述定位机构靠近所述定位孔处设有铰接装置，所述第一定位环边沿铰接在所述铰接装置且所述第一定位环搭接在所述定位孔的外端口处，所述第二定位环边沿铰接在所述铰接装置且所述第二定位环搭接在所述第一定位环的侧部，所述第一定位环外径大于所述定位孔内径，所述第一定位环内径小于所述定位孔内径，所述第二定位环外径大于所述第一定位环外径，所述第二定位环内径小于所述第一定位环内径；

所述定位孔的外侧设有第一定位座，所述第一定位座的外侧设有第二定位座，所述第一定位座和所述第二定位座分别用于固定所述第一定位环和所述第二定位环；

所述加热锅底部设有若干个呈碗状的限位座，所述限位座位于每个定位孔的正下方，所述限位座的内壁上设有多个槽环，使不同型号的加热瓶能通过定位孔稳定地放置在所述限位座上；

所述定位孔上固定装有联动叶，所述联动叶包括呈片状的第一片叶、第二片叶和第三片叶，所述第一片叶、所述第二片叶和所述第三片叶的内边缘均相互铰接，所述第一片叶固定连接在所述定位孔边缘，所述第二片叶固定连接在所述第一定位环上，所述第三片叶固定连接在所述第二固定环上，所述第一片叶、所述第二片叶和所述第三片叶呈曲折状，所述第一片叶不可转动、所述第二片叶能带动所述第一定位环沿着所述铰接装置转动，所述第三片叶能带动所述第二定位环沿着所述铰接装置转动；所述定位孔附近还设有第三定位环，所述第三定位环铰接在所述定位板表面并能盖在所述第二定位环上；

通过选择并转动合适的定位环在所述定位孔上来匹配不同规格的加热瓶，使在加热过程中加热瓶的稳定效果更加良好；

所述加热锅底部设有加热隔层，所述加热隔层内设有多段并联的加热丝，每一段加热丝都设有接入开关，所述储水箱下方设有电源组件，所述加热锅内部设有温度传感器，所述箱体外侧设有智能控制板，所述智能控制板包括数字液晶显示屏、微处理器和操作面板，通过所述操作面板能设置水浴的温度及时间，同时还能控制所述储水箱流入所述加热锅中的水量，所述数字液晶屏能实时显示加热锅中的水温和剩余加热时间，所述微处理器通过控制所述接入开关能控制工作的加热丝数量，从而控制加热强度，所述微处理器通过所述所述温度传感器反馈的检测温度及时地改变加热强度，使加热锅中的水始终保持在预设的温度；

所述箱体还包括箱盖，所述箱盖内侧设有一冷凝空腔，所述冷凝空腔呈倒圆锥形，所述冷凝空腔连接一冷凝管，所述冷凝管呈倾斜状，所述冷凝管的低端连接至所述蓄水箱的上方，所述冷凝管的高端连接至所述冷凝空腔的底部，所述冷凝空腔的底部设有圆孔与所述冷凝管连通，所述冷凝空腔的圆锥面上设有若干微小的蒸汽孔，所述冷凝空腔的上侧内表面为导热金属板，当水浴锅加热时，产生的水蒸气通过所述蒸汽孔进入到所述冷凝空腔内部，遇到所述导热金属板后液化成水珠顺着所述冷凝空腔的内壁汇聚到所述冷凝空腔底部，然后沿着所述冷凝管回归至所述储水箱中，所述箱盖上还设有稳压排气孔，所述稳压排气孔上设有配重块，所述配重块使得所述箱体内的气压不超过1.3倍的标准大气压，超出时将通过稳压排气孔进行泄压，所述加热锅内还设有水压计，所述微处理器将所述水压计测得的水压换算成水面高度并通过控制所述出水管的开关将储水箱中的水补充至所述加热锅中，以弥补因蒸发而缺少的水分，使所述加热锅中的水面始终保持在一个高度并让加热瓶能够均匀地受热。

虽然上面已经参考各种实施例描述了本发明，但是应当理解，在不脱离本发明的范围的情况下，可以进行许多改变和修改。也就是说上面讨论的方法，系统和设备是示例。各种配置可以适当地省略，替换或添加各种过程或组件。例如，在替代配置中，可以以与所描述的顺序不同的顺序执行方法，和/或可以添加，省略和/或组合各种部件。而且，关于某些配置描述的特征可以以各种其他配置组合，如可以以类似的方式组合配置的不同方面和元素。此外，随着技术发展其中的元素可以更新，即许多元素是示例，并不限制本公开或权利要求的范围。

在说明书中给出了具体细节以提供对包括实现的示例性配置的透彻理解。然而，可以在没有这些具体细节的情况下实践配置例如，已经示出了众所周知的电路，过程，算法，结构和技术而没有不必要的细节，以避免模糊配置。该描述仅提供示例配置，并且不限制权利要求的范围，适用性或配置。相反，前面对配置的描述将为本领域技术人员提供用于实现所描述的技术的使能描述。在不脱离本公开的精神或范围的情况下，可以对元件的功能和布置进行各种改变。

综上，其旨在上述详细描述被认为是例示性的而非限制性的，并且应当理解，以上这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明的记载的内容之后，技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。