一种重组传染性脓疱溶瘤病毒及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种ORFV溶瘤病毒及其制备方法和应用，本发明的重组传染性脓疱溶瘤病毒的制备方法，包括以下步骤：(1)overlap PCR扩增权利要求7所述蛋白的基因p53；(2)连接到pSPV‑EGFP载体，插入p53基因得到重组质粒p53‑pSPV‑EGFP，随后再插入ORFV132基因的左右侧，构建穿梭质粒ORFV132LF‑p53‑pSPV‑EGFP‑ORFV132RF；(3)将其转化宿主菌TOP10，获得阳性重组菌，(4)转染OFTu细胞后荧光鉴定p53和EGFP的融合表达；制得纯化的重组传染性脓疱溶瘤病毒。(5)制得的重组传染性脓疱溶瘤病毒能够在OFTu和多种肿瘤细胞中复制增殖，并有效抑制多种肿瘤细胞生长。本发明在显微镜中即可观察，易于操作，方便快捷，大大缩短了筛选时间。