一种基于单根生精小管灌注的睾丸组织冻存方法

摘要

本发明涉及一种基于单根生精小管灌注的睾丸组织冻存方法，包括步骤：先将睾丸组织制成单根生精小管，然后将单根生精小管置于冻存保护剂1中浸泡10min，再使用冻存保护剂2对生精小管浸泡和灌注，实现玻璃化降温的同时最大程度地减少保护剂的渗透损伤，接着将灌注后的生精小管迅速转移至Cryo‑piece单精子冻存薄片上，套入Cryo‑tubule后直接浸入液氮中进行快速降温，降温后迅速置于复苏液中浸泡。相较于传统睾丸细胞悬液冻存方法本发明方法优点为：(1)保留了生精小管的完整结构；(2)有效减少睾丸细胞的氧化应激水平；(3)有效减少冻存后大量精原细胞和支持细胞的死亡；(4)生精小管内精子的回收率和活性高。