一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用

摘要

本发明公开了一种柞蚕核型多角体病毒穿梭载体的构建方法及应用，属于生物技术领域。本发明利用细菌人工染色体克隆载体构建一个包括含有lacZα报告基因和细菌转座子Tn7转座靶点序列的DNA片段、AnpeNPV多角体蛋白基因启动子序列和上游基因部分序列DNA片段、及多角体蛋白基因3’末端部分编码区序列和下游基因部分序列DNA片段的转移载体，将线性化转移载体质粒DNA与线性化的AnpeNPV基因组DNA共转染Tn‑High Five细胞，得到重组AnpeNPV。将该重组AnpeNPV基因组DNA转化至大肠杆菌中，获得AnpeNPV穿梭载体AnpeNPV‑bacmid。它既可以在大肠杆菌中以质粒DNA方式复制，亦可在Tn‑High Five昆虫细胞以及柞蚕蛹体内以病毒DNA方式复制，具有感染性。