用于极限糊精酶基因克隆的引物、试剂盒及克隆方法

摘要

本发明提出一种用于极限糊精酶基因克隆的引物、试剂盒及克隆方法，属于基因克隆技术领域，能够解决目前麦芽RNA提取较为困难，步骤繁琐复杂，而导致RNA纯度与质量不高，无法得到全长极限糊精酶基因的问题。该技术方案包括根据极限糊精酶基因序列设计五段基因序列，针对其中四段基因序列LD‑2、LD‑3、LD‑4、LD‑5设计上下游特异性引物，利用上下游引物克隆极限糊精酶基因，包括：极限糊精酶基因片段合成、重叠延伸PCR、全长基因的获得。本发明原理简单，操作简便，有效解决了大麦长片段目的基因难以扩增的难题；且该方法对麦芽RNA的纯度和产量要求较低；极限糊精酶的基因克隆及其N端序列优化为异源表达以及酶学性质研究奠定基础。