单亚基RNA聚合酶KP34RP在长链mRNA合成中的生产应用

摘要

本发明公开单亚基RNA聚合酶KP34RP在长链mRNA合成中的生产应用，所述单亚基RNA聚合酶为类噬菌体单亚基RNA聚合酶，通过KP34RP制备长链cap‑cas9mRNA，见序列表SEQ ID NO.4，IRES‑cas9 mRNA，见序列表SEQ ID NO.5，和IRES‑sox7 mRNA，见序列表SEQ ID NO.6，cas9被广泛运用于基因编辑，sox7在胚胎发育中起重要作用。构建三种mRNA转录模板质粒时在其基因序列5’端和3’端加入了来源于非洲爪蟾核质蛋白定位信号序列NLS，见序列表SEQ ID NO.1、来自于丙肝病毒内部核糖体进入位点序列IRES，见序列表SEQ ID NO.2和poly(A)+BspQ I，见序列表SEQ ID NO.3序列元件，保证体外合成的mRNA在细胞内能被高效翻译成具有活性的功能蛋白。产物均一，纯度高，均达到毫克级别，完全能满足市场对于mRNA研究和应用需求。