大肠杆菌RNA聚合酶σ亚基互作蛋白在基因转录中的作用

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符号说明

第一章 细菌RNA聚合酶结构功能（文献综述）

1.1引言

1.2 大肠杆菌RNAP

1.2.1 大肠杆菌RNAP结构与功能

1.2.2 RNAP结晶结构

1.3 RNAP突变与结构对环境胁迫的适应

1.3.1 RNAP突变对利福平的抗性

1.3.2 RNAP突变对高渗透环境的适应

1.3.3 RNAP突变对其他极端环境的适应

1.4 结语

第二章 大肠杆菌RNA聚合酶σ亚基互作蛋白在基因转录中的作用

2.1 引言

2.1.1分子伴侣蛋白

2.1.2功能未知蛋白YhgF

2.1.3研究目的与意义

2.2实验材料

2.2.1菌种和质粒

2.2.2引物

2.2.3主要培养基的配制

2.2.4主要试剂来源及其配制

2.3实验方法

2.3.1质粒构建

2.3.2 感受态细胞制备及转化

2.3.3 一步失活法构建突变菌株

2.3.4 Western Blot

2.3.5 蛋白的表达及纯化

2.3.6 生物大分子实验分析蛋白间相互作用

2.3.7 流式细胞仪分析细胞DNA复制式样

2.3.8 细胞倍增时间（Doubling Time）的测定

2.3.9 细菌双杂交实验

2.3.10激光共聚焦扫描显微镜检测伴侣蛋白与RpoD荧光定位

2.3.11细胞运动性检测

2.3.12 q-PCR验证转录组测序结果

2.3.13Miller法测定β-半乳糖苷酶活性检测

2.3.14 GFP-Trap免疫共沉淀

2.4结果

2.4.1 RpoD与伴侣蛋白ClpB，HtpG，DnaK和YhgF相互作用

2.4.2 RpoD荧光定位

2.4.3 RNA-seq结果表明缺失伴侣蛋白影响基因组转录

2.4.4ΔclpB、ΔyhgF、ΔhtpG和ΔdnaK表型分析

2.4.5 QseB/QseC信号途径对伴侣蛋白表达的影响

2.5讨论

2.5.1 RNA聚合酶σ亚基RpoD与ClpB、HtpG、DnaK、YhgF相互作用

2.5.2伴侣蛋白缺失严重影响基因组表达

2.5.3 缺失DnaK引起细胞运动能力降低

2.6结论

参考文献

致谢

攻读博士期间发表的论文

附表