过表达CgGsh1基因提高产甘油假丝酵母2-苯乙醇耐受性及产量

摘要

本发明属于基因工程领域，具体涉及CgGsh1基因的克隆及利用该基因在产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes CCTCC M 93018)中的过表达，获得2‑苯乙醇耐受性及产量均提高的产甘油假丝酵母重组菌株。方法是，利用如SEQ ID No.2和3所示的引物扩增产甘油假丝酵母基因组DNA片段，确定该扩增的DNA片段序列与酿酒酵母Gsh1基因为同源性序列，命名为CgGsh1，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。利用CgGsh1基因与GAP强启动子构建了过表达重组载体pGAPa‑CgGsh1，通过化学转化法将该重组载体导入尿嘧啶营养缺陷型产甘油假丝酵母中，获得重组菌株。与空载对照菌株相比，重组菌株在高浓度2‑苯乙醇(4g/L)外界环境下具有较明显的生长优势。且在发酵结束时，重组菌株的生长量提高了8.0％，2‑苯乙醇的产量提高了9.1％，达到3.6g/L。