一种cfDNA中超低频突变的检测方法

摘要

一种cfDNA中超低频突变的检测方法，其步骤包括文库构建、桥式PCR和测序，文库构建包括末端补平、加A、加接头、PCR扩增，在加接头时，使用1:1的颈环接头和Y字型接头。本发明颈环接头和Y字型接头结合使用，由于Y字型接头上标记有随机序列index，基因组坐标始末位点相同的DNA片段加上完全相同的Y字型接头的概率极低，那么对于始末位点相同的测序reads，就很容易判断它们来自同一还是多个原始细胞释放出来的cfDNA，从而降低测序duplication。同时颈环接头将DNA片段的正负链连成一条链，二者的测序reads自然配对，提高了对假阳性的分辨率，从而保证了对cfDNA中超低频突变的检测能力。