能应用于互作蛋白筛选的在植物细胞中完整表达的改造的DH5α BirA基因及其构建方法

摘要

本发明公开一种能在植物细胞中完整表达的改造的DH5αBirA基因，所述改造的DH5αBirA基因与野生的DH5αBirA基因的差异在于第118位氨基酸(由R变成G)，以及剪接识别位点的AG区域。还公开一种重组真核表达载体，其包含如前所述的改造的DH5αBirA基因。还公开一种如前所述的重组真核表达载体的构建方法，其包括以下步骤：获得野生的DH5αBirA基因；对所述野生的DH5αBirA基因的第352位碱基的突变，以及对可变剪接的剪切位点进行点突变，以获得能完整表达的改造的DH5αBirA基因，命名为BirAG基因。所述改造的BirAG基因及其构建方法为检测蛋白质相互作用技术实现条件。本发明改造的BirAG基因能在植物细胞中完整表达，与目的基因融合后在植物中表达可以生物素化与目的基因互作的植物蛋白。本发明是一种有效的筛选植物互作蛋白的方法。