一种应用于丝状真菌中特异性沉默基因的干扰质粒pHX-RNAi

摘要

本发明公开了一种应用于丝状真菌中特异性沉默基因的干扰质粒pHX‑RNAi，该质粒包括一个完整的潮霉素抗性基因表达盒，一个草酸青霉来源的启动子，一个草酸青霉来源的内含子结构；该干扰质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了该质粒在丝状真菌草酸青霉菌中对一些很难敲除的基因进行单基因或多基因表达沉默的应用。本发明以草酸青霉中淀粉酶基因amy15A为例，证实了了干扰质粒pHX‑RNAi的高效稳定性，并以amy15A和cel7A‑2双基因干扰为例，验证了载体pHX‑RNAi用于多基因沉默的优势。SDS‑PAGE，酶活测定以及RT‑qPCR检测结果表明RNA干扰在转录后水平发挥了显著且稳定的作用，预示该干扰质粒在丝状真菌中具有良好的应用前景。