克隆转基因生物中外源基因整合位点处侧翼序列的方法

摘要

本发明公开了一种克隆转基因生物中外源基因整合位点处侧翼序列的方法。该方法包括：1)根据转基因生物中已知外源基因设计6条引物，按照在所述外源基因上的位置自5’到3’依次记为F1、R2、R3、AD、F2和F3；2)设计随机引物AP，所述AP为在AD的3’端添加如下结构的9‑11个随机核苷酸：自5’到3’为3个除N以外的简并核苷酸、2‑4个N、4个特定核苷酸(在受体生物的基因组序列中出现频率大于1/256的4个连续核苷酸或其反向互补序列)；3)以所述转基因生物基因组为模板，采用F1/AP进行PCR扩增，Exo I酶切扩增产物；以酶切产物为模板采用F2/R2进行PCR扩增；以扩增产物为模板，采用F3/R3进行PCR扩增获得所述侧翼序列。本发明为转基因植物的检测和安全评价提供了技术支撑。