一种化学标记结合LC-MS的方法及其在核苷酸分析中的应用

摘要

本发明公开了一种化学标记结合LC‑MS的方法及其在核苷酸分析中的应用。本发明使用N,N‑二甲基对苯二胺（DMPA）对包括两种甲基化修饰的核苷酸在内的10种单磷酸核苷酸进行化学标记，在显著改善了这些修饰核苷酸在反相液相色谱中的保留行为的同时，也极大地提高了它们在质谱中的检测灵敏度。该方法灵敏度高、选择性高，可利用液液萃取有效除去过量标记试剂DMPA，可利用Strata X固相萃取小柱除去过量的活化剂EDC，可以定量检测生物体中极低丰度的甲基化修饰的胞嘧啶核苷酸，可显著改善核苷酸在LC中的分离以及其在ESI‑MS检测灵敏度，使其信号响应提高1‑2个数量级。