表皮干细胞构建组织工程化角膜上皮植片的制备方法及其用途

摘要

本发明公开了一种用表皮干细胞构建的人工角膜上皮植片的制备及用于移植修复因角膜缘干细胞缺损而失明的眼表的用途。表皮干细胞构建的人工角膜上皮植片，无菌采取成人颈部或关中奶山羊耳缘皮肤，用组块培养法和克隆筛选法分离纯化表皮干细胞，用无血清培养基进行扩增，并对所获干细胞进行CK₁₉、P63、integrin-β₁等表皮干细胞的标志蛋白免疫组织化学检测；再将纯化的表皮干细胞接种在去上皮细胞的人类羊膜支架上，无血清培养基培养，培养21天后，表皮干细胞在羊膜上分化形成复层，成为表皮干细胞羊膜植片；经透射电镜观察，表皮干细胞分为5-6层细胞；具有正常角膜上皮相似结构。以羊为实验动物模型进行自体或同种异体表皮干细胞羊膜植片移植均取得良好效果。