一种以微生物克隆载体生产治疗血管疾病基因药物血管内皮生长因子－2裸DNA的方法

摘要

本方法从受孕小鼠胚胎克隆了鼠源性VEGF-2(mVEGF-2)基因，然后从新生儿胎盘克隆人源性VEGF启动子(hVEGF promoter)，并使mVEGF-2被hVEGFpromoter所驱动，插入哺乳动物表达载体pEGSH中，构建出能够在原核细胞中以高拷贝数产生大量DNA、并能在原核和哺乳动物细胞中均能表达的载体pEGVPV。用这载体转化E.coli DH5α后，获得的DNA拷贝数有2000个/细胞之多，从细胞培养物中分离的DNA产量能够达到1.5mg/L。本发明还提供了一种以微生物生产血管内皮生长因子-2(vascular endothelial growth factor2，VEGF-2)DNA药物的方法。血管内皮生长因子能特异性地作用于血管内皮细胞，强烈促进其增殖和血管形成，并有升高血管通透性的作用。缺血型动物模型实验表明，向局部缺血组织显微注射该裸DNA可促进新生血管形成，增强侧枝循环的建立，有效地改善了缺血组织的血液供应。本方法可提供一种治疗血管疾病的新方案。