一种靶向冠状病毒蛋白酶的药物筛选模型及其应用

摘要

本发明提供一种基于细胞的靶向冠状病毒蛋白酶新型药物筛选模型。冠状病毒多聚蛋白1a(1ab)加工产物中nsp3，nsp4和nsp6含有转膜(TM)结构域，这些转膜结构域可介导蛋白质定位于细胞内质网(ER)膜上。本发明利用nsp3，nsp4和nsp6含有转膜结构域和在细胞内定位等特征，使用分泌性报告基因，构建由冠状病毒蛋白酶-蛋白酶识别位点-分泌性报告基因组成的真核表达DNA构建体。转染细胞后通过冠状病毒蛋白酶切割活性释放报告基因表达产物并分泌到细胞上清中，通过细胞上清中报告基因活性来检测冠状病毒蛋白酶活性，用于冠状病毒药物筛选。