一种植物乳杆菌GUANKE免疫菌株在制备治疗过敏性鼻炎产品中的应用

摘要

本发明公开了一种植物乳杆菌GUANKE免疫菌株在制备治疗过敏性鼻炎产品中的应用，并公开了一种包括GUANKE免疫菌粉的治疗过敏性鼻炎产品。植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵得到的GUANKE免疫菌粉对过敏性鼻炎的症状有良好的改善作用；可缓解各类鼻炎症状如流鼻涕、鼻痒、打喷嚏、流眼泪、瘙痒等，对鼻塞和鼻部症状的控制有很好的效果。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种植物乳杆菌GUANKE免疫菌株在制备治疗过敏性鼻炎产品中的应用。

背景技术

过敏性鼻炎也称为变应性鼻炎(Allergic Rhinitis,AR)，是指特应性个体暴露于过敏原(变应原)后主要由免疫球蛋白E(Immunoglobulin E,IgE)介导的鼻黏膜非感染性慢性炎性疾病。临床表现主要为鼻痒、喷嚏、鼻塞和流涕。过敏性鼻炎影响着全世界10％～20％的人口，已成为全球性的健康问题。该病导致劳动效率下降，每年在欧盟国家造成300亿～500亿欧元的经济损失。

目前对过敏性鼻炎的治疗方式有多种，例如：1)环境控制：主要是指避免或减少接触过敏原和各种刺激物；2)药物治疗：主要是抗组胺类的药物等；3)免疫治疗：针对IgE介导的Ⅰ型变态反应性疾病的对因治疗，即给予患者逐步增加剂量的过敏原提取物(治疗性疫苗)，诱导机体免疫耐受，使患者再次接触相应过敏原时症状明显减轻，甚或不产生临床症状；4)外科治疗：手术。

目前临床上使用的一线治疗AR药物包括糖皮质激素(糠酸莫米松、倍他米松等)、第二代抗组胺药(西替利嗪、氯雷他定等)、白三烯受体拮抗剂(孟鲁司特、扎鲁司特等)。上述现有疗法或药物可有效缓解AR症状，却无法彻底治愈疾病，并且药物在临床上使用后引起很多不良反应，包括鼻黏膜出血、口腔念珠菌感染、心律不齐和药物耐受等，导致该疾病难以有效的控制与治愈。而免疫疗法周期长，花费大，病人依从性差，治疗结果个体差异大，且目前可接受免疫治疗的变应原类别较少。手术治疗不仅成本高，而且还会对身体造成不同程度上的创伤，损伤人体正气，且远期疗效不确切。

免疫菌(Immunobiotics)是指那些可以通过刺激人体黏膜免疫系统，发挥免疫调节、抗感染等作用的细菌。免疫菌作为非特异性免疫调节因子，可以通过细菌本身或细胞壁成分刺激免疫细胞，使其激活。已有多项研究显示免疫菌对过敏性疾病有一定的预防和治疗效果。免疫菌对过敏性鼻炎、阿尔兹海默症、哮喘和食物过敏等疾病都具有一定的治疗效果。

在调节免疫功能的角度上分析，免疫菌调节机体免疫系统主要基于以下几点：平衡Thl/Th2细胞的数量，促进Thl细胞介导的细胞因子的分泌，降低IgE的分泌量，增强树突状细胞对抗原的耐受性，激活NK细胞，促进Toll样受体的功能，产生足够的分泌型IgA等作用效果等。

CN 113308396 A公开了植物乳杆菌GUANKE免疫菌株在制备疫苗免疫增强剂中的应用，但该菌株的免疫调节应用还有待开发。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种植物乳杆菌GUANKE免疫菌株的新应用，可用于调节免疫，治疗过敏性鼻炎。植物乳杆菌GUANKE免疫菌株对过敏性鼻炎的症状有改善作用；可缓解流鼻涕、鼻痒、打喷嚏、流眼泪、瘙痒等鼻炎症状，对鼻塞和鼻部症状的控制有很好的效果。

本发明采用的技术方案是，一种植物乳杆菌GUANKE免疫菌株在制备治疗过敏性鼻炎产品中的应用。

所述植物乳杆菌GUANKE免疫菌株的保藏号为CGMCC NO.21720，保藏日期为2021年01月22日，保藏分类命名为Lactobacillus Plantarum(植物乳杆菌)GUANKE株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

所述产品包括食品、保健品或药物。

进一步，本发明还提供一种治疗过敏性鼻炎产品，所述产品包括植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵得到的GUANKE免疫菌粉。

所述GUANKE免疫菌粉为由植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵、冻干得到的冻干菌粉，其中的活菌数为10

所述治疗过敏性鼻炎产品可以为治疗过敏性鼻炎的组合物，所述组合物包括植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵得到的GUANKE免疫菌粉和至少一种或多种人体可接受的药用辅料或食品添加剂等。

所述所述治疗过敏性鼻炎产品可以制备成各种剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、液体剂型等。

进一步地，所述所述治疗过敏性鼻炎产品的服用方法优选为口服。

进一步，所述治疗过敏性鼻炎产品为治疗过敏性鼻炎的组合物，由包括如下质量份数的组分制备得到：赤藓糖醇14～20份、麦芽糊精2～6份、抗性糊精2～6份、异麦芽酮糖2～4份、植物乳杆菌GUANKE免疫菌粉0.5～1.5份、蔓越莓果粉0.4～0.8份、维生素C 0.2～0.6份。

植物乳杆菌GUANKE免疫菌粉是由植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵、冻干得到的菌粉。

优选的，所述治疗过敏性鼻炎的组合物包括如下质量份数的组分制备而成：赤藓糖醇15～19份、麦芽糊精3～5份、抗性糊精3～5份、异麦芽酮糖3份、植物乳杆菌GUANKE免疫菌粉0.6～1.4份、蔓越莓果粉0.5～0.7份、维生素C 0.3～0.5份。

所述治疗过敏性鼻炎的组合物中，活菌数为150～350亿/g，优选为500～1000亿/3g。

治疗过敏性鼻炎的组合物为颗粒剂时，优选按以下方法制得：按配方比取各原料，消毒后混匀，其中植物乳杆菌GUANKE免疫菌粉解冻后再和其他原料混合，消毒后分装，制得所述治疗过敏性鼻炎的组合物。

本发明的有益效果在于：临床实验验证证明，植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵得到的GUANKE免疫菌粉对过敏性鼻炎的症状有良好的改善作用；可缓解各类鼻炎症状如流鼻涕、鼻痒、打喷嚏、流眼泪、瘙痒等，对鼻塞和鼻部症状的控制有很好的效果。

GUANKE免疫菌对过敏性鼻炎产生作用的分子基础主要是使一些炎症细胞因子，主要是趋化因子水平发生改变；使用CXCL1,CXCL5,CXCL11,OSM,NRTN这五个蛋白的改变，可以较好地预测GUANKE免疫菌对过敏性鼻炎的效果。

本发明为治疗过敏性鼻炎提供了新方向，本发明的GUANKE免疫菌可应用于食品、保健品和药品领域，具有非常好的产业前景。

附图说明

图1为鼻炎症状总分、鼻炎伴随症状总分、鼻炎控制评估测试分值在两个不同时间点的变化曲线图(n＝47)。

图2为TNSS鼻炎量表中，各指标在两个不同时间点的具体变化曲线图。

图3为TNNSS鼻炎量表中，各指标在两个不同时间点的具体变化曲线图。

图4为RCAT鼻炎量表中，各指标在两个不同时间点的具体变化曲线图。

图5为差异表达的炎症细胞因子的火山图。

图6为差异表达的炎症细胞因子的通路富集分析图。

图7为所有差异表达的炎症细胞因子的箱图。

图8为基于差异表达的炎症细胞因子对过敏性鼻炎的ROC分析图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。

实施例1：

制备GUANKE免疫菌粉

按CN 113308396A公开的方法，将保藏号为CGMCC NO.21720的植物乳杆菌GUANKE免疫菌株发酵、冻干得到GUANKE免疫菌粉。

制备含GUANKE免疫菌粉的组合物：

赤藓糖醇17份、麦芽糊精4份、抗性糊精4份、异麦芽酮糖3份、植物乳杆菌GUANKE 1份、蔓越莓果粉0.6份、维生素C 0.4份；

制备方法为，

植物乳杆菌GUANKE免疫菌粉解冻，按配方比取各原料，消毒后混匀，消毒、分装，每包3g，含GUANKE免疫菌活菌数为500亿/3g，制得含GUANKE免疫菌粉的组合物。

实施例2：

过敏性鼻炎服用GUANKE免疫菌粉实验方案

志愿者填写问卷调查，筛选符合纳入排除标准的过敏性鼻炎患者志愿者纳入研究中。在第0周和第4周分别进行问卷调查并收集全血，分离血浆。本实验方案中共收集了47名符合要求的志愿者，对这些人进行服用益生菌前、后的比较。

纳入标准：

1.性别不限，年龄大于18周岁，小于60周岁，自述患过鼻炎或有鼻炎症状的人。

2.未患有明确诊断过的疾病，在服用益生菌期间不服用鼻炎或其他相关药物。

排除标准：

1.患有明确的呼吸系统或其他疾病的。

2.孕妇不纳入。

所有纳入研究的志愿者均口服实施例1制备的含GUANKE免疫菌粉的组合物，用量：1袋/天，每袋3g，含GUANKE免疫菌活菌数为500亿/3g，连续服用4周。

(一)分别于第0周和第4周分别填写鼻炎问卷调查表。

鼻炎问卷调查表包括：

1、鼻炎症状总分表(Total nasal symptom score,TNSS)，如表1所示，共4个问题，每项分值0-3分，将各症状得分相加的总和作为TNSS，用于治疗前后评价，以评估疗效。

表1鼻炎症状总分表TNSS

2、鼻炎伴随症状总分表(Total non-nasal symptom score,TNNSS)，如表2所示，共5个问题，回答“是”(计1分)或“否”(计0分)，将各症状得分相加的总和作为TNNSS，用于治疗前后非鼻炎症状的评价。

表2鼻炎伴随症状总分表TNNSS

3、鼻炎控制评估测试(Rhinitis control assessment test,RCAT)，反映患者过去1周内AR症状的控制水平，如表3所示，包括6个条目，每个条目分别记1～5分，各项条目得分相加得到总分。总分越高，说明症状控制越好。

表3鼻炎控制评估测试RCAT

根据上述问卷，在第0周和4周分别统计一次总分，计算各组的平均分并制作分值在两个不同时间点的变化曲线图，进行配对T检验比较是否有显著性。

图1所示为47位志愿者在第0周和第4周的鼻炎症状总分、鼻炎伴随症状总分、鼻炎控制评估测试分值的变化曲线图。**代表p<0.01、***代表p<0.001。

图2所示为47位志愿者在第0周和第4周TNSS鼻炎量表中各鼻炎相关指标的变化曲线图。可见流鼻涕、鼻痒、打喷嚏的症状有明显好转。**代表p<0.01，***代表p<0.001。

图3所示为47位志愿者在第0周和第4周TNNSS鼻炎量表中各鼻炎伴随症状的变化曲线图。可见流眼泪、鼻或咽部瘙痒的症状有明显好转。**代表p<0.01，***代表p<0.001。

图4所示为47位志愿者在第0周和第4周RCAT鼻炎量表中对鼻炎控制情况的变化曲线图。可见对鼻塞和鼻部症状有很好的控制效果。

(二)志愿者于第0周和第4周分别抽血并分离血浆，基于Olink技术进行炎症细胞因子的检测。

使用

图5所示为基于Olink检测炎症细胞因子水平的差异表达蛋白的火山图。结果表明，共有14个蛋白在使用GUANKE免疫菌处理后显著低于使用前的表达，而6个蛋白显著高于使用前的表达。

图6所示为差异显著的炎症细胞因子的通路富集分析图。结果表明，这些显著富集的信号通路主要包括与炎症反应、免疫反应、细胞因子活性、趋化因子活性等相关的。

图7所示为所有差异显著的炎症细胞因子，主要包括炎症因子、趋化因子以及其他细胞因子等，如：CXCL5、CXCL1、CXCL6、CXCL11、CCL4、CCL23、IL7、IL33、IL20、IL4、OSM、NT3、MMP1、MMP10、CD6、NRTN、SCF、TGFα、TGFβ1、AXIN1。

图8所示为基于差异蛋白对过敏性鼻炎的ROC分析结果图。ROC曲线是指在特定刺激条件下，以被试者在不同判断标准下所得的假阳性率为横坐标，以真阳性率为纵坐标，画得的各点的连线。AUC(area under the ROC curve,AUC)即ROC曲线下面积，被用来评估某靶点的诊断价值，AUC越大，该靶点的诊断价值越高。一般来说，AUC≈1.0为最理想的检查指标；AUC在0.8以上，该靶点准确性高；AUC＝0.5，该靶点无诊断价值。我们挑选差异蛋白p值最小的TOP5，绘制其单独ROC曲线(如图8A)，以及通过逻辑回归模型计算总ROC曲线(如图8B)。结果显示，CXCL11的AUC值为0.652，OSM的AUC值为0.6636，CXCL1的AUC值为0.6813，CXCL5的AUC值为0.7485，NRTN的AUC值为0.6736。使用这5个蛋白进行整体的逻辑回归分析，总的AUC值达到0.8742，因此，基于这5个蛋白的差异表达可很好地预测GUANKE免疫菌对过敏性鼻炎的缓解效果。