一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体

摘要

本发明涉及细胞外泌体技术领域，具体为一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，包括基础培养基、重组人胰岛素：5mg/L、人转铁蛋白：7mg/L、重组人纤连蛋白：31mg/L、人血清白蛋白：3.2g/L、维生素C：100mg/L、维生素B6：12mg/L、维生素B1：110mg/L、维生素A：36mg/L、EGF(表皮生长因子)：6μg/L、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)：15μg/L、β‑巯基乙醇：11mg/L、谷胱甘肽：3mg/L、长梗秦艽酮：3umol/L。本发明制备后的细胞外泌体溶液可应用于皮肤干燥综合征的治疗，具有促进皮肤细胞再生、保湿、修复损伤等作用，从而改善皮肤的干燥状况。

说明书

技术领域

本发明涉及细胞外泌体技术领域，具体为一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体。

背景技术

细胞外泌体是指细胞释放到细胞外的一类小型囊泡，其直径一般在30到150纳米之间，细胞外泌体在医学和生物研究中具有广泛的应用价值，由于细胞外泌体携带了丰富的生物标志物，可以作为疾病诊断和预后评估的潜在生物标记物，此外，细胞外泌体还可以用作药物传递系统，通过包裹和释放药物分子，实现靶向治疗和基因传递。

皮肤干燥综合征，又被称为干燥皮肤症状，是一种皮肤状况，其特征是皮肤缺乏足够的水分和油脂，导致皮肤失去水分和保湿能力，表现为干燥、粗糙、脱屑和紧绷的症状，目前，对于皮肤干燥综合征的治疗主要依靠个人皮肤护理方法，这种方法存在，治疗效果较慢，康复时间长，治疗效果不佳的问题。

发明内容

为了克服上述的技术问题，本发明的目的在于提供一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，以解决上述背景技术中提出的目前的治疗方法存在，治疗效果较慢，康复时间长，治疗效果不佳的问题的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，其特征在于，包括以下成分：基础培养基、重组人胰岛素：5mg/L、人转铁蛋白：7mg/L、重组人纤连蛋白：31mg/L、人血清白蛋白：3.2g/L、维生素C：100mg/L、维生素B6：12mg/L、维生素B1：110mg/L、维生素A：36mg/L、EGF(表皮生长因子)：6μg/L、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)：15μg/L、β-巯基乙醇：11mg/L、谷胱甘肽：3mg/L、长梗秦艽酮：3umol/L。

所述基础培养基为a-MEM或DMEM。

针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体的制备方法，包含如下步骤：将重组人胰岛素、人转铁蛋白、重组人纤连蛋白、人血清白蛋白、维生素C、维生素B6、维生素B1L、维生素A、EGF(表皮生长因子)、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)、β-巯基乙醇、谷胱甘肽、长梗秦艽酮按比例混合成治疗溶液；将混合好的治疗溶液接种混合至制备好的培养液的培养器中，确保培养器内的氧气浓度控制在5～8％(体积百分比)，将培养器放置在恒温培养箱中，将温度控制在37℃，进行静态培养，培养时间为96小时；将培养器中的培养液收集，并进行离心处理，使用离心机，设置离心力为1500-2500g，离心时间为8-15分钟，小心地吸取上清液，即外泌体溶液，将上清液转移至合适的储存容器中，储存于低温环境中，如-80℃，以确保细胞外泌体的稳定性和活性。

所述重组人胰岛素选择使用中等作用型胰岛素。

所述β-巯基乙醇的浓度范围是0.1％至2％之间。

所述人血清白蛋白需要进行灭菌处理，且要储存在低温冷藏保存，以保持其稳定性和活性。

所述制备方法制得的一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体在制备促进皮肤细胞再生、保湿、修复损伤药物中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、该一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，通过基础培养基、重组人胰岛素：5mg/L、人转铁蛋白：7mg/L、重组人纤连蛋白：31mg/L、人血清白蛋白：3.2g/L、维生素C：100mg/L、维生素B6：12mg/L、维生素B1：110mg/L、维生素A：36mg/L、EGF(表皮生长因子)：6μg/L、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)：15μg/L、β-巯基乙醇：11mg/L、谷胱甘肽：3mg/L、长梗秦艽酮：3umol/，这些成分进行制备，制备后的细胞外泌体溶液可应用于皮肤干燥综合征的治疗，具有促进皮肤细胞再生、保湿、修复损伤等作用，从而改善皮肤的干燥状况；

2、该一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，通过在细胞外泌体上接种对皮肤治疗的药物，使得人体在注射这种外泌体时，外泌体会包裹治疗药物，精准到达指定的靶向皮肤细胞上，通过外泌体将治疗药物输送到皮肤细胞中，从而完成对皮肤干燥综合征的治疗，此治疗方法，相较于目前只能养护的方式，这种治疗更加直接有效，能缩短治疗时间，提高治疗效果。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供的一种实施例：一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体，其特征在于，包括以下成分：基础培养基、重组人胰岛素：5mg/L、人转铁蛋白：7mg/L、重组人纤连蛋白：31mg/L、人血清白蛋白：3.2g/L、维生素C：100mg/L、维生素B6：12mg/L、维生素B1：110mg/L、维生素A：36mg/L、EGF(表皮生长因子)：6μg/L、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)：15μg/L、β-巯基乙醇：11mg/L、谷胱甘肽：3mg/L、长梗秦艽酮：3umol/L，其中具体成分的作用如下：重组人胰岛素：胰岛素在皮肤健康中起着重要作用，能促进皮肤细胞的生长和修复，并提供保湿效果。它有助于维持皮肤的水分平衡，减轻干燥和脱屑症状；

人转铁蛋白：转铁蛋白具有抗氧化和抗炎作用，可保护皮肤免受自由基和氧化损伤。它还有助于提供营养和氧气到皮肤细胞，促进细胞的新陈代谢和修复；

重组人纤连蛋白：纤连蛋白是一种重要的结构蛋白，存在于皮肤组织中，可以增强皮肤的弹性和紧致度。它有助于修复受损的皮肤组织，减少水分流失，改善皮肤干燥和松弛问题；

人血清白蛋白：血清白蛋白具有良好的保湿能力，能够吸附并保持皮肤表面的水分，形成保护层，减少水分流失，从而改善皮肤干燥的情况；

维生素C：维生素C是一种强效的抗氧化剂，能够中和自由基，减少氧化应激对皮肤的损害。它还促进胶原蛋白的合成，有助于维持皮肤的弹性和柔软度；

维生素B6和维生素B1：这些维生素在皮肤健康中发挥重要作用，有助于细胞代谢和能量产生，维持正常的皮肤功能；

维生素A：维生素A是皮肤细胞的重要成分，对于皮肤细胞的正常生长和再生至关重要。它能够改善皮肤的弹性和光滑度，减少皮肤干燥和粗糙的情况；

EGF(表皮生长因子)和bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)：这些生长因子能够促近皮肤生长。

基础培养基为a-MEM或DMEM，a-MEM是一种改良的最小必需培养基，为无血清培养提供了基本的营养物质和环境，它包含了许多对细胞生长和增殖至关重要的成分，主要成分包括以下几个方面：氨基酸：a-MEM中含有完整的氨基酸组合，提供细胞合成蛋白质所需的原料，糖类：a-MEM中含有葡萄糖作为能量来源，维持细胞代谢的正常运作，维生素：a-MEM含有多种维生素，包括维生素B群、维生素C、维生素E等，提供细胞生长和代谢所需的辅酶和辅助因子，矿物质：a-MEM含有多种矿物质，如钠、钾、钙、镁等，维持细胞内外的离子平衡和正常功能，缓冲剂：a-MEM中含有缓冲剂，维持培养液的pH稳定，蛋白质衍生物：a-MEM中可以添加牛血清蛋白(BSA)或人血清白蛋白，提供细胞所需的附加营养物质和支持细胞生长的因子，DMEM是一种改良的鹰酮酸盐培养基，经过调整和改良以更好地满足细胞培养的需求，DMEM中含有各种矿物质，如钠、钾、钙、镁等，维持细胞内外的离子平衡和正常功能，氨基酸衍生物：DMEM中可以添加胰蛋白胨(peptone)或酵母提取物等氨基酸衍生物，提供细胞生长所需的附加营养物质，缓冲剂：DMEM中含有缓冲剂(如HEPES)，维持培养液的pH稳定，血清：DMEM中可以添加胎牛血清(FBS)或其他类型的血清，提供细胞所需的生长因子、激素和营养物质，抗生素/抗真菌剂：为了预防细菌和真菌污染，DMEM中常添加抗生素(如青霉素/链霉素)和抗真菌剂(如氨溴索)，DMEM是一种全面的培养基，适用于多种细胞类型的培养。它提供了必需的营养物质和支持细胞生长所需的环境。根据具体的实验要求和细胞类型，可以根据需要调整DMEM的成分或添加额外的补充物。

一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体的制备方法，包含如下步骤：将重组人胰岛素、人转铁蛋白、重组人纤连蛋白、人血清白蛋白、维生素C、维生素B6、维生素B1L、维生素A、EGF(表皮生长因子)、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)、β-巯基乙醇、谷胱甘肽、长梗秦艽酮按比例混合成治疗溶液；将混合好的治疗溶液接种混合至制备好的培养液的培养器中，确保培养器内的氧气浓度控制在5～8％(体积百分比)，将培养器放置在恒温培养箱中，将温度控制在37℃，进行静态培养，培养时间为96小时；将培养器中的培养液收集，并进行离心处理，使用离心机，设置离心力为1500-2500g，离心时间为8-15分钟，小心地吸取上清液，即外泌体溶液，将上清液转移至合适的储存容器中，储存于低温环境中，如-80℃，以确保细胞外泌体的稳定性和活性。

重组人胰岛素选择使用中等作用型胰岛素，培养宿主细胞：选择适当的宿主细胞，常见的包括大肠杆菌(E.coli)和酵母等，将宿主细胞培养在含有适当营养物质和抗生素的培养基中，以促进细胞生长和表达目标基因，构建表达载体：设计和构建一个含有目标基因(胰岛素基因)的表达载体，表达载体通常包括启动子、启动子调控元件、信使RNA起始子、终止子和选择性标记等功能区域，转染宿主细胞：将构建好的表达载体导入宿主细胞中，常用的转染方法包括热激转化、电穿孔、化学转染等，通过转染，将表达载体引入宿主细胞的核内，培养和表达：培养转染后的宿主细胞，在适当的培养条件下，如温度、培养基成分等，促进目标基因的表达和蛋白质合成，提取和纯化：将培养的宿主细胞收获，经过细胞破碎和离心等处理，提取目标蛋白质，包括重组人胰岛素，纯化和检测：利用分离纯化技术，如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等，去除杂质，纯化重组人胰岛素，同时，通过蛋白质浓度测定和其他检测方法，确认蛋白质的纯度和浓度，后续处理：经过纯化和检测后，可以对重组人胰岛素进行结构和功能的进一步研究，如质谱分析、活性测定和稳定性评估等，

β-巯基乙醇的浓度范围是0.1％至2％之间，是一种常用的还原剂和蛋白质变性剂，它可以用于许多生化实验和分子生物学研究中，以下是β-巯基乙醇的制备方法：准备所需材料和试剂：乙醇(酒精)硫酸(浓度为98％)碱(如氢氧化钠或氢氧化钾)蒸馏水反应容器(如烧瓶)操作步骤：a.在化学通风橱或通风良好的实验室中进行操作，b.在反应容器中加入一定量的蒸馏水，c.将乙醇缓慢地滴加到蒸馏水中，并充分搅拌，d.按照一定的比例向混合溶液中加入硫酸，通常使用的比例是每100ml溶液中加入0.1ml到1ml的硫酸，注意，加入硫酸时会产生热量，因此应小心操作，避免剧烈反应，e.混合溶液会发生酸碱反应，生成β-巯基乙醇，这个过程伴随着发热和气体释放，f.继续搅拌混合溶液，直到反应停止，g.将制备好的β-巯基乙醇溶液保存在密封容器中，避免暴露在空气中。

人血清白蛋白需要进行灭菌处理，且要储存在低温冷藏保存，以保持其稳定性和活性是一种重要的血浆蛋白，具有多种生物学功能以下是一种常见的人血清白蛋白制备方法：准备所需材料和试剂：新鲜人全血样本防凝剂(例如柠檬酸钠或EDTA)离心管冷藏离心机蒸馏水反应容器(例如烧瓶)混合溶液(例如生理盐水)操作步骤：a.在化学通风橱或通风良好的实验室中进行操作b.从新鲜的人全血样本中采集血液，并立即加入防凝剂以防止凝固c.将采集的血液样本置于冷藏离心机中，并以适当的速度(例如3000rpm)离心，以分离血浆d.将离心后的血浆转移到干净的反应容器中，并加入适量的混合溶液稀释血浆，以调整适当的蛋白浓度e.搅拌混合溶液，使血浆充分溶解f.将混合溶液置于低温环境(例如4℃)下，在搅拌条件下继续保存一段时间(例如数小时)g.使用超速离心机将混合溶液进行离心处理，以去除残留的细胞碎片和沉淀物h.将离心后的上清液收集起来，并使用过滤器或纯化技术(如凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析等)进一步纯化人血清白蛋白i.对纯化得到的人血清白蛋白进行浓缩、冻干或适当的保存方式。

制备方法制得的一种针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体。

的针对皮肤干燥综合征治疗的细胞外泌体在制备促进皮肤细胞再生、保湿、修复损伤药物中的应用。

工作原理：通过基础培养基、重组人胰岛素：5mg/L、人转铁蛋白：7mg/L、重组人纤连蛋白：31mg/L、人血清白蛋白：3.2g/L、维生素C：100mg/L、维生素B6：12mg/L、维生素B1：110mg/L、维生素A：36mg/L、EGF(表皮生长因子)：6μg/L、bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)：15μg/L、β-巯基乙醇：11mg/L、谷胱甘肽：3mg/L、长梗秦艽酮：3umol/，这些成分进行制备，制备后的细胞外泌体溶液可应用于皮肤干燥综合征的治疗，具有促进皮肤细胞再生、保湿、修复损伤等作用，从而改善皮肤的干燥状况。通过在细胞外泌体上接种对皮肤治疗的药物，使得人体在注射这种外泌体时，外泌体会包裹治疗药物，精准到达指定的靶向皮肤细胞上，通过外泌体将治疗药物输送到皮肤细胞中，从而完成对皮肤干燥综合征的治疗，此治疗方法，相较于目前只能养护的方式，这种治疗更加直接有效，能缩短治疗时间，提高治疗效果。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。