一种低频超声场辅助酶解制备降脂牡蛎肽的方法

摘要

本发明涉及多肽技术领域，为开发牡蛎蛋白资源，公开了一种低频超声场辅助酶解制备降脂牡蛎肽的方法，包括以下步骤：由脱壳、去内脏团的牡蛎组织经高温变性、提取蛋白、低频超声场辅助胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶二次酶解、灭活、收集500～1000Da的分子、再分离纯化得到。本发明利用胃蛋白酶酶解，再经胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶二次酶解，并全过程酶解采用间歇式低频超声场辅助，获得的牡蛎肽，蛋白质含量高，分子量小，易于人体吸收利用，在胃肠道环境具稳定性，且得率高。

说明书

技术领域

本发明涉及多肽技术领域，尤其是涉及一种低频超声场辅助酶解制备降脂牡蛎肽的方法。

背景技术

近年来随着物质生活水平的不断提高，我国居民从传统的植物性食物为主的膳食结构向高脂肪、低碳水化合物的膳食结构发展，导致肥胖的发生率逐年增加。当前肥胖已经成为全球性的公共卫生问题而被广泛关注。许多研究已经证明了肥胖是代谢综合征发生最常见的危险因素，而且还是糖尿病、心脑血管疾病和多种癌症发生的重要诱因。目前，治疗肥胖的药物主要分为非中枢性减肥药、中枢性减肥药和降糖药物，长期服用会引起肝损害、油性大便、心慌、手抖等不良反应。然而食品功能性物质在肥胖的缓解或预防的应用时却未见异常反应。因此，从食物蛋白中发掘减脂功能的活性肽是对肥胖人群减重降脂治疗的代替手段。

牡蛎蛋白及其水解物被报道具有多种生物活性，例如降血压，抗血栓等，但其对降脂活性尚未见报道或公布。为了提高牡蛎蛋白的利用度，通常先采用碱溶酸沉方法提取制备较高含量的牡蛎蛋白，然而该方法制备的牡蛎蛋白水溶性颗粒度大，基于常规的酶解方法，其水解度以及酶解效率均较为低下，最终导致获得的目标功能多肽生产量低。本专利的多肽制备技术方案采用了高温变性后的去内脏团牡蛎组织蛋白，采用间歇式低频超声场辅助胃蛋白酶酶解，以及胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶二次酶解，提高了蛋白的水解率和目标多肽的生产率，同时还提高了酶的利用率。本专利采用低频超声场辅助酶解，经检索，未见该方法未与酶解同时使用的报道，具有创新性、高效率的优势。

发明内容

为开发牡蛎资源，本发明的目的在于：提供一种降脂牡蛎肽的制备方法，通过对牡蛎原材料进行高温变性、酶解等工序得到牡蛎制备的多肽，本发明制备的牡蛎多肽，分子量小，产量高，活性高，可以显著降低高脂饮食小鼠的体重。

为实现本发明的技术目的，本发明提供如下的技术方案：

一种低频超声场辅助酶解制备降脂牡蛎肽的方法，包括以下步骤：

(1)将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织85-95℃加热10～15min，以1:5g/mL～1:8g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆；

(2)碱溶酸沉方法提取牡蛎蛋白，碱溶条件为向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至10.0～11.0，磁力搅拌1～3h，离心取上清液，酸沉条件为用HCl调节pH至5.0～5.4，离心取蛋白沉淀；

(3)将步骤(2)得到的蛋白沉淀以1:2g/mL-1:4g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆得到匀浆液，再向匀浆液中加入胃蛋白酶酶解，再经胰蛋白酶和风味蛋白酶双酶二次酶解，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解；

(4)将步骤(3)最终酶解液经100℃加热10～15min灭酶处理，4500～6000r/min离心30～50min后取上清液；

(5)过滤步骤(4)所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，收集滤液，冻干后得多肽粉。

作为本发明的优选方案，步骤(2)具体为：使用NaOH调节pH至10.0～11.0，间歇式匀浆5～8min，4～8℃条件下磁力搅拌2～3h；然后4～8℃条件下，采用8000～10000r/min，离心15～20min后取上清液；使用HCl调节pH至5.0～5.4，4～8℃条件下，采用8000～10000r/min再离心15～20min后取沉淀；

作为本发明的优选方案，步骤(3)中：加入胃蛋白酶酶解，保持蛋白溶液的pH值为1.5～2.0，酶解时间为2～4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为蛋白溶液中蛋白质含量的2.5～3.5wt％，后加入胰蛋白酶和风味蛋白双酶二次酶解，保持匀浆液的pH值为8.0～9.0，酶解时间为4～8h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为蛋白溶液中蛋白质含量的2.5～3.5wt％(，风味蛋白酶加入量为蛋白溶液中蛋白质含量的0.3～0.8wt％，胃蛋白酶的活力1500～2500U/g，胰蛋白酶酶活力为50000～80000U/g，风味蛋白酶酶活力为30000～50000U/g。

作为本发明的优选方案，步骤(3)中低频超声方法为：酶解全程采用间歇式低频超声场超声，超声频率为40、60、80kHz同步超声，超声功率为10～15W，超声方式为：一个超声周期内，然后超声30～50s，间歇60～80s，重复上述超声周期至酶解完成。

本发明还提供了一种上述方法制备得到的牡蛎肽。

本发明还提供了上述牡蛎肽在制备降脂功能的药物或制剂中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明通过低功率超声辅助酶解，使得其酶的利用率显著提高，多肽得率提高了11.78％，水解度提高了15.60％，大大降低了生产成本。

(2)本发明制备得到的牡蛎多肽，其减脂的功能大幅提升。且制得的多肽具有蛋白含量高、分子量小、易于吸收、胃肠道环境中稳定、得率高等优势。

附图说明

图1为本发明的生产工艺流程图。

图2为牡蛎肽对小鼠体重、肝脏和附睾脂肪重量的影响。

图3为牡蛎肽对小鼠肝脏组织结构的影响。

图4为牡蛎肽对小鼠血清生化指标的影响。

图5为牡蛎肽小鼠肝脏脂肪合成相关基因SREBP-1c、ACC1表达的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步阐述和说明。所述实施例仅是本公开内容的示范且不圈定限制范围。本发明中各个实施方式的技术特征在没有相互冲突的前提下，均可进行相应组合。

如无特别说明，本发明中所采用的原料均可从市场上购得或是本领域常用的，如无特别说明，下述实施例中的方法均为本领域的常规方法。

多肽得率计算

蛋白水解率测定

将含量为0.1％(w/w)2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)试剂溶解到水里。所有未消化样品、消化样品和标准溶液均在0.1％(w/w)SDS中溶解。在试管中2.0mL浓度为0.2125M磷酸钠缓冲液，pH8.2，再加入0.25mL的相同浓度的样品或标准溶液。每个离心管中加入2.0mLTNBS试剂，然后振荡器进行混合并在50℃下避光水浴孵化在60min。覆盖孵育后，每管加入4.0mL 0.1M HCl终止反应。然后在室温下冷却30min，最后用分光光度计在340nm测量吸光度值。按下式计算蛋白水解率：

AN

AN

Npb：基质蛋白中肽键的含氮量。单位为mg/g蛋白。

实施例1

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，按1:5g/mL的料液比。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为40、60、80kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例1

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为40、80kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例2

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为40、60kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例3

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为60、80kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例4

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为80kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例5

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为60kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例6

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，全程采用间歇式低频超声场辅助酶解，超声频率为40kHz，超声功率为10W，超声方式为超声30s，间歇60s，超声波处理期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

对比例7

将牡蛎去壳、去内脏团后，取剩余组织90℃加热10min，1:5g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆。向牡蛎匀浆液中加入NaOH调节pH至12.0，间歇式匀浆5min，4℃条件下磁力搅拌3h，4℃条件下，采用10000r/min离心15min后取上清液，再用HCl调节pH至5.4，4℃条件下，采用10000r/min再离心15min后取沉淀。将得到的蛋白沉淀1:3g/mL的料液比加入蒸馏水匀浆，向匀浆液中加入酶活力为1500U/g胃蛋白酶酶解，保持匀浆液的pH值为1.5，酶解时间为4h，酶解温度36～38℃，胃蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，后加入酶活力为50000U/g胰蛋白酶和酶活力为30000U/g风味蛋白酶，期间保持匀浆液的pH值为8.2，酶解时间为3h，酶解温度36～38℃，胰蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的1.5wt％，风味蛋白酶加入量为匀浆液中蛋白质含量的0.3wt％。最终得到的酶解液100℃加热10min灭酶处理，4500r/min离心30min后取上清液。过滤所得的上清液采用纳滤膜截留分子量500～1000Da的分子，冻干后得多肽粉。

结果如表1

表1

根据表1，与对比例7相比，实施例1水解度提高了15.60％，多肽得率提高了11.78％，表明低频超声场可以提高蛋白的水解率和目标多肽的生产率，使得酶的利用效率大大提升。与其余对比例相比得，组合多种低频超声频率的蛋白水解率和目标多肽的得率高于单一低频超声频率，组合低频超声较单一低频超声会发生更多的空化效应，空化效应会瞬时产生高温、高压、高能量密度冲击波、微射流等作用，会对酶分子的构象造成影响，进而提高酶活力，最终提高蛋白的水解率和目标多肽的生产率。

本发明牡蛎肽对高脂饲料喂养导致的小鼠肥胖模型的药效学研究

取健康雄性SPF级C57BL/6J小鼠24只，4-6周龄，体重15～18g，分笼饲养，自由饮水，温度25±1℃，湿度为50±3％，光暗循环12h。普通饲料喂养一周后，除正常组小鼠外，其余小鼠均喂食高脂饲料(每100g含繁殖鼠料49.5g，猪油20.4g，蔗糖15g，酪蛋白12.3g，预混料2g，麦芽糊精0.8g)，同时给予随机分组，每组8只，分为3组。实验分组如下①正常组：普通饲料+无菌水；②高脂模型组：高脂饲料+无菌水；③实施例1组：高脂饲料+500mg/kg BW/day实施例1中得到的牡蛎肽。在喂饲料的同时，每天上午牡蛎肽组灌胃给予牡蛎肽，正常组和模型组给予等量的无菌水。每天按体重调整给药剂量，给药16周。

在饲养过程中注意对动物精神状态、饮食、活动、粪便颜色及性状等一般情况的观察，并每周称量动物体重，检查饲喂高脂饲料及药物灌胃对动物身体状况的影响。

病理切片HE染色：

小鼠处死，取出肝，除去杂组织，用预冷的PBS漂洗除去血液，滤纸吸干，浸入4％多聚甲醛固定，经过脱水、浸蜡包埋、切片、展片、附贴、烤片后进行染色。通过对HE的吸附、吸收，酸性细胞核核被碱性苏木素染成蓝色，碱性胞浆被酸性伊红染成红色，结果使胞核呈蓝色，胞浆呈红色。

血清中生化指标的测定：

末次给药后，称量体重，处死小鼠，采用心脏取血，4℃条件下静置2h后，4000r/min离心15min，取上清液保存于-20℃冰箱。按剂盒说明书中所述方法，测定TC、TG、LDL-C和HDL-C含量。取出肝脏，用PBS冲洗血液，用滤纸吸干。肝脏、附睾脂肪称重。

实时荧光定量PCR测定小鼠肝脏脂肪合成相关基因SPEBP-1c、ACC1表达水平：

取80-100mg在超低温冰箱保存的小鼠肝脏组织，放入液氮中冷冻并研磨，收集并置于灭菌无酶的离心管中，加入1mL预冷Trizol轻轻吹打直至液体澄清。在室温下静置5分钟。加入200μL氯仿并剧烈摇晃15s，室温静置5分钟。4℃转速12000r/min条件下离心15分钟。吸取上层水相放入新的无菌离心管中，加入等量异丙醇。充分振荡混匀后继续在4℃12000r/min转速条件下离心15分钟。弃掉上清用1mL预冷后的75％乙醇溶液充分洗涤RNA沉淀，去除杂质。然后在4℃12000r/min转速条件下离心5分钟弃去多余上清，将RNA沉淀置于超净台上晾干。待RNA沉淀变干燥后，加入60-100μL DEPC水溶解。用核酸蛋白定量仪测定ODA260/A280值、ODA260/A230值和提取RNA样品的浓度。最后采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA样品的纯度。

将已检测纯度的RNA用于反转录，根据TIANGEN反转录试剂盒说明书进行具体操作得到cDNA。

将不同样品的cDNA稀释至同一浓度，根据试剂盒说明进行荧光定量反应体系配置。将反应液混合均匀并放置于荧光定量仪扩增反应体系。反应结束后进行定量分析。以内参基因β-actin作为空白对照，按2

实验结果：

1、牡蛎肽对小鼠体重、肝脏重量、附睾脂肪重量的影响

实验结果如图2所示，高脂模型组体重、肝脏重量和附睾脂肪重量与正常组相比有显著差异。实施例1组小鼠体重、肝脏重量和附睾脂肪重量在一定程度上减轻。实验结果提示，牡蛎肽在一定程度上可以减轻小鼠体重、肝脏重量和附睾脂肪重量。

2、牡蛎肽对小鼠肝脏组织结构的影响

实验结果如图3所示，与正常组相比，高脂模型组肝索排列紊乱，肝细胞内出现明显的空泡，局部可见炎细胞浸润。牡蛎肽可明显改善上述病理状况。

3、牡蛎肽对小鼠血清生化指标的影响

实验结果如图4所示，高脂模型组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与正常组相比均有显著差异。牡蛎肽都能明显降低小鼠血清中TC、TG和LDL-C含量，升高HDL-C含量，与模型组比较基本有显著性差异。实验结果提示，牡蛎肽可以在一定程度上明显改善高脂饲料喂养导致的肥胖和血脂紊乱。

4、牡蛎肽小鼠肝脏脂肪合成相关基因SREBP-1c、ACC1表达的影响

实验结果如图5所示，与正常组相比高脂模型组SREPF-1c、ACC1表达上调，显示高脂饲料喂养可引起肝脏中甘油三酯代谢途径紊乱并产生脂质的蓄积。而实施例1组SREPF-1c、ACC1的表达显著下调。实验结果提示，牡蛎肽是通过作用于SREPF-1c、ACC1而发挥降甘油三酯的作用。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。