菲律宾蛤仔南方群体和北方群体的杂交育种方法

摘要

本发明涉及一种菲律宾蛤仔南方群体和北方群体的杂交育种方法，属于水产养殖中贝类遗传育种技术领域，所述方法为收集北方群体和南方群体，以壳长为选育指标，选择壳长前10％的个体作为亲本，分别开展南方群体和北方群体内的快生长选育，分别获得南方群体和北方群体的选育F1代，并培育至性成熟；以同样的选育方式，分别获得南方群体和北方群体的选育F2代，挑选个发育良好的个体作为候选亲本，放置在同一室内培育池中进行同步促熟；对亲贝进行人工催产，采用的方法包括淡水冲洗、高浓度藻水投喂和气流刺激；获得杂交后代在生长和存活方面表现出明显的杂种优势。

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖中贝类遗传育种技术领域，具体涉及一种菲律宾蛤仔南方群体和北方群体的杂交育种方法，以培育适宜我国南北方养殖、生长速度快、成活率高的蛤仔新品种(系)。

背景技术

杂交育种是一种在水产动物育种中被广泛应用的方法，它可以通过将不同亲本杂交来获得基因组合不同的杂交后代。特别是在贝类育种中，种内杂交和种间杂交都被认为是培育优良品种的有效手段之一。在进行杂交育种时，亲本的选择是非常关键的，不是任意两个种群的杂交都能获得杂种优势。因此，考察亲本的性状遗传能力就显得尤为重要。亲本应该具有一定的遗传差异，并且应该表现出较高的互补性和杂合优势。通过对亲本的性状(包括体型、生长速度和适应性等)、亲缘关系及地理分布等方面进行考察和评估，可以更好地选择适合杂交的亲本。

在进行贝类育种时，不同种群之间的杂交可以产生更多的遗传变异，从而提高后代的适应性和生产力。此外，在贝类杂交育种过程中，杂交后代通过基因组合的重新排列来消除不良基因和提高优良基因的表达，获得杂种优势，从而培育具有优良性状的贝类新品种。

菲律宾蛤仔(Ruditapesphilippenarum)是我国四大养殖贝类之一，广泛分布于我国南北沿海地区，其生长快、适应性强、养殖周期短，是一种适合高密度养殖的优良贝类。但近年来，随着菲律宾蛤仔养殖规模的快速扩大，开始出现养殖的蛤仔生长慢、出肉率低、夏季死亡率高等问题，严重制约了其养殖产业的健康发展。在菲律宾蛤仔养殖过程中，经常出现生长缓慢、夏季死亡等现象，因此培育生长快、抗逆性强的优良新品种是实现蛤仔养殖业健康可持续发展的关键。

发明内容

本发明的目的在于提供一种菲律宾蛤仔南方群体和北方群体的杂交育种方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种菲律宾蛤仔南方群体和北方群体的杂交育种方法，所述方法具体如下：

步骤一：收集北方群体和南方群体，以壳长为选育指标，选择壳长前10％的个体作为亲本，分别开展南方群体和北方群体内的快生长选育，分别获得南方群体和北方群体的选育F1代，并培育至性成熟；

步骤二：以步骤一同样的选育方式，分别获得南方群体和北方群体的选育F2代，挑选个发育良好的个体作为候选亲本，放置在同一室内培育池中进行同步促熟；

步骤三：对亲贝进行人工催产，采用的方法包括淡水冲洗、高浓度藻水投喂和气流刺激；

所述的淡水冲洗为从培育池中取出待产出的亲贝，使用淡水对亲贝进行全面冲洗10-15min；

所述的高浓度藻水投喂为将高浓度角毛藻藻水缓慢倒入待产出亲贝周围，促进亲贝的摄食，所述的高浓度角毛藻为200-400万/ml；

所述的气流催产为打开催产池中的充氧管，气石放在亲贝附近，以加快周围水流速度；

步骤四：受精卵转入孵化桶内连续充气孵化，孵化后的幼虫采用渐进式的方法投喂金藻和角毛藻。

进一步，在幼虫孵出后的前三天，按照藻量4000-6000个/ml的标准，投喂金藻，之后开始逐渐增加角毛藻的比例，投喂比例为角毛藻：金藻为1:4，逐渐增加到1:3、1:2、1:1，一周之后，全部改为投喂角毛藻；幼虫培育密度保持在8～10个/mL，水温为18～25℃，pH为7.8～8.2，盐度为19～27psu。

本发明与现有技术相比较，具有以下优点：

首先，本发明收集的南方蛤仔群体与北方蛤仔群体具有显著的遗传分化和较大的遗传距离，通过开展南方群体与北方群体内的连续2代生长选育，获得具有优良性状的南方群体与北方群体选育F2代，南方群体与北方群体的杂交后代在生长和存活方面表现出明显的杂种优势。

其次，我国南北方温差大，导致了蛤仔北方群体和南方群体在环境适应方面各有优势。北方群体更能适应低温环境，南方群体生长在较温暖的海域，更能适应高温环境，因此南方群体与北方群体杂交后代的适温范围更广，具有较高的环境适应能力。

此外，蛤仔是雌雄异体贝类，亲本排精产卵不同步，本发明将南方选育群体与北方选育群体放在同一室内水泥池中进行同步促熟和催产，挑出排精或产卵的亲本，采用淡水冲洗、高浓度藻水投喂和气流刺激的方法刺激雌雄亲贝同步产卵和排精，同时采用淡水冲洗贝壳表面，单独收集精卵，有效避免了交叉污染。

附图说明

图1为蛤仔自交和杂交后代早期阶段的成活率统计图。

具体实施方式

下面通过实施例来对本发明的技术方案做进一步解释，但本发明的保护范围不受实施例任何形式上的限制。

实施例1

一种菲律宾蛤仔南方群体和北方群体的杂交育种方法，所述方法具体步骤如下：

1)收集山东莱州湾蛤仔群体(北方群体)和广东湛江蛤仔群体(南方群体)，以壳长为选育指标，选择壳长前10％的个体作为亲本，开展南方群体和北方群体内的快生长选育，分别获得南方群体和北方群体的选育F1代，待稚贝培育至壳长8-10mm，在滩涂培育至性成熟。

2)以同样的选育方式，选择性腺成熟的选育F1代，选择壳长前10％的个体作为亲本，获得南方群体和北方群体的选育F2代，经培育至性成熟后，挑选个体大、性腺饱满的个体作为候选亲本，南方群体和北方群体的磁性亲本和雄性亲本均单独放置在一个待产筐中，共6个待产筐放置在同一水泥池中进行室内同步促熟，控制水温在17℃以下。

3)采用淡水冲洗、高浓度藻水投喂、气流刺激等方式对亲本进行人工催产；

所述的淡水冲洗取出催产池中待产出的亲贝，并将其放置在平地上，然后打开淡水水阀，对亲贝进行全面冲洗滋润，10-15分钟，这可以刺激亲贝的产卵排精。

所述的高浓度藻水投喂为准备20升水桶取高浓度(200万左右/ml)的角毛藻藻水缓慢倒入待产出亲贝周围。这将促进亲贝的摄食，并刺激亲贝产卵排精。

所述的气流刺激为打开催产池中的充氧管，并在待产出亲贝附近设置充氧管，然后将充氧管的气石放入待产筐(带孔塑料筐规格为长1.2m×宽0.6m×高0.2m)中，每个待产筐中放置2个气石，气石的规格为直径3cm，高4cm，以加快周围水流速度并不断刺激亲贝产卵排精。

在夜间催产中，对产框中的亲贝进行诱导产卵排精的实验，分为三组，分别使用不同的方法或方法组合来诱导产卵排精。具体如下：

第一组亲贝仅使用气流刺激，在约5个小时左右开始产卵排精，产出占比约为65％。

第二组亲贝使用方法高浓度藻水投喂和气流刺激，在约2.5到3个小时之间开始产卵排精，产出占比约为70％。

第三组亲贝使用了淡水冲洗、高浓度藻水投喂、气流刺激3种方法的组合，在约1个小时左右成功产卵排精，产出比例约为75％。

当部分个体出现产卵排精后，从南方选育亲本和北方选育亲本中分别挑选雌、雄个体，并用淡水冲洗贝壳表面，防止交叉污染，分别放置于单独的精卵收集桶中，获得南方选育群体的精子和卵子(Z♂和Z♀)，北方选育群体的精子和卵子(L♂和L♀)。

4)将收集好的四组精卵(L♀、L♂、Z♀和Z♂)，采用双列杂交方法进行人工授精，建立南北方选育群体的自交组(北方自交系LL：L♀×L♂；南方自交系ZZ：Z♀×Z♂)和杂交组(正交LZ：L♀×Z♂和反交ZL：Z♀×L♂)，获得南北方选育群体的自交和杂交子代。

5)将受精卵转入50L大白桶内连续充气孵化，孵化后的幼虫经选优后，每组设置3个重复。在不同发育时期，定期测量壳长生长和成活率。幼虫培育密度保持在8～10个/mL，水温为18～25℃，pH为7.8～8.2，盐度为19～27psu。各组幼虫培育期间，每隔一天进行全换水一次。在幼虫孵出选优后的前三天，按照藻量4000-6000个/ml的标准，投喂金藻，之后开始逐渐增加角毛藻的比例，投喂比例为角毛藻：金藻为1:4，逐渐增加到1:3、1:2、1:1，一周之后，全部改为投喂角毛藻；每日根据幼虫摄食的实际情况进行投喂。

6)通过对自交组和杂交组幼虫和稚贝的壳长测量，发现正交组LZ和反交组ZL壳长在第15天后显著高于两个自交组。正交组LZ的生长速度比自交组LL提高28.36％，反交组ZL的生长速度比自交组LL提高34.33％。其中，反交组ZL壳长的杂种优势率在第20天最大，为33.42％。通过比较各组在第5、10、15、20天的成活率，发现杂交组的成活率均显著高于自交组(图1)。在第20天，反交组ZL的成活率最高(40％)，正交组LZ的成活率(28％)次之，但仍远高于自交组LL和ZZ的成活率(6.67％和11.00％)。