一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法

摘要

本发明公开一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将处理后的血清、血浆或其他检查样本稀释液加入分装盒，稀释液从导流管进入反应盒内；步骤二：打开电机，在相关元件的带动下，使一组所述反应盒运动到预设位置，实现相邻的所述反应盒相互远离；步骤三：打开电动推杆二，在相关元件的带动下，实现盖子运动到预设位置。本发明涉及病毒诊断方法领域，具体地讲，涉及一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法。本发明要解决的技术问题是提供一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法，方便猪病毒性腹泻病原鉴别。

说明书

技术领域

本发明涉及病毒诊断方法领域，具体地讲，涉及一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法。

背景技术

每年冬春季爆发于规模化养猪场的腹泻常由不同病毒引起，临床表现为相似腹泻症状。为了区分临床腹泻样本中的病毒性病原体，迫切需求建立一种快速同时检测常见6种病毒性腹泻疾病的病原技术。

引起猪腹泻的因素很多，比如：微生物等病原体(病毒；细菌；寄生虫)、环境等诱发因素(中毒性；转栏应激；寒冷应激)引起的，而由病毒引起的腹泻是危害最严重和最难以防控的一类传染性疾病，各种年龄猪都可发病，尤其是 3～10日龄仔猪最易发病。猪的病毒性腹泻相关病原常包括：猪流行性腹泻病毒 (Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)(Zuoet al.,2018)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)(Wang et al.,2019)、猪Delta冠状病毒(Porcine delta coronavirus,PDCoV)(McCluskeyet al., 2016)、猪博卡病毒(Porcine bocavirus,pBCaV)(Blomstrom et al.,2009)、猪诺如病毒(Porcine norovirus,pNoV)(Silva et al.,2015)、猪轮状病毒 (Porcinerotavirus,pRV)(Tatte et al.,2019)等。PEDV、TGEV、PDCoV都属于冠状病毒科冠状病毒属，一种有囊膜的单股正链RNA病毒(Koonpaewet al., 2019)；pBCaV属于细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属，一种无囊膜的单股DNA 病毒(Mc

对猪流行性腹泻病毒进行检测时，在管中加入按照浓度要求混合均匀的探针1.5μL和缓冲液1.5μL，混合均匀后，95℃保温1min，然后60℃孵育4h，温度降至54℃时暂停PCR仪；杂交探针的连接：加入32μL连接酶混合液(3μL连接酶缓冲液A，3μL连接酶缓冲液B，25μL无RNA酶的 H

目前，还缺少一种方法实现针对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)S基因、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible troenteritis virus,TGEV)N基因、猪Delta冠状病毒(Porcine delta coronavirus,PDCoV)N基因、猪博卡病毒(Porcinebocavirus,pBCaV)NS1基因、猪诺如病毒(Porcine norovirus,pNoV)RdRp基因、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,pRV)六种病毒进行同时鉴别诊断。此为，现有技术的不足之处。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法，方便猪病毒性腹泻病原鉴别。

本发明采用如下技术方案实现发明目的：

一种猪病毒性腹泻疾病病原鉴别诊断的多病毒批量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：将处理后的血清、血浆或其他检查样本稀释液加入分装盒，稀释液从导流管进入反应盒内；

步骤二：打开电机，在相关元件的带动下，使一组所述反应盒运动到预设位置，实现相邻的所述反应盒相互远离；

步骤三：打开电动推杆二，在相关元件的带动下，实现盖子运动到预设位置；

步骤四：操作电动推杆一，在相关元件的带动下，实现所述盖子盖住相应的所述反应盒；

步骤五：在不同的所述反应盒内加入不同的试剂，并打开加热器，使每个所述反应盒内稀释液及试剂处于不同的温度以及保温不同的时间，保温时间结束后，关闭相应的所述加热器；

步骤六：依次反向操作所述电动推杆一、所述电动推杆二及所述电机；

步骤七：观察所述反应盒内稀释液的变化或提取处理好的稀释液；

所述电机固定连接底板，所述电机的输出轴穿过所述底板，所述电机的输出轴固定连接齿轮，所述底板固定连接圆柱，所述圆柱轴承连接圆环板，所述圆环板固定连接齿圈，所述齿圈啮合所述齿轮，所述圆环板固定连接一组均匀分布的圆杆一，每个所述圆杆一分别转动连接连杆一的一端，每个所述连杆一的另一端分别转动连接L杆，每个所述L杆的横杆分别穿过回形块，每个所述回形块分别固定连接所述底板，每个所述L杆的竖杆分别固定连接对应的所述反应盒。

作为本技术方案的进一步限定，所述步骤二的具体步骤如下：所述电机带动所述齿轮转动，所述齿轮带动所述齿圈转动，所述齿圈带动所述圆环板转动，所述圆环板带动所述圆杆一摆动，所述圆杆一带动所述连杆一摆动，所述连杆一带动所述L杆沿所述回形块移动，所述L杆带动所述反应盒移动。

作为本技术方案的进一步限定，所述圆柱固定连接所述分装盒，所述分装盒固定连通一组均匀分布的所述导流管。

作为本技术方案的进一步限定，所述分装盒固定连接所述电动推杆一，所述电动推杆一的推杆端固定连接方杆，所述方杆固定连接圆环，所述圆环固定连接一组均匀分布的圆杆二，每个所述圆杆二分别固定连接圆板，所述圆板固定连接所述电动推杆二，所述电动推杆二的推杆端穿过所述圆板，所述电动推杆二的推杆端固定连接半球，所述半球设置有一组均匀分布的槽口，每个所述槽口内分别设置有圆轴，每个所述圆轴分别固定连接所述半球，每个所述圆轴分别转动连接连杆二的一端，每个所述连杆二的另一端分别转动连接槽口杆，每个所述槽口杆分别穿过所述圆环，每个所述圆环分别固定连接L形杆，每个所述L形杆分别固定连接对应的所述盖子，每个所述盖子分别固定连接对应的所述加热器，每个所述盖子分别固定连接一组均匀分布的所述竖管。

作为本技术方案的进一步限定，所述步骤三的具体步骤如下：所述电动推杆二带动所述半球移动，所述半球带动所述圆轴移动，所述圆轴带动所述连杆二摆动，所述连杆二带动所述槽口杆移动，所述槽口杆带动所述L形杆、所述盖子、所述加热器及所述竖管移动。

作为本技术方案的进一步限定，所述步骤四的具体步骤如下：所述电动推杆一带动所述方杆、所述圆环、所述圆杆二、所述圆板、所述电动推杆二、所述半球、所述圆轴、所述连杆二、所述槽口杆、所述L形杆、所述盖子、所述加热器及所述竖管移动。

作为本技术方案的进一步限定，所述盖子下表面采用橡胶材料，使所述盖子与所述反应盒接触时实现密封。

作为本技术方案的进一步限定，每个所述L杆分别固定连接弹簧的一端，每个所述弹簧的另一端分别固定连接。

作为本技术方案的进一步限定，所述电机、所述电动推杆一及所述电动推杆二分别电性连接控制器。

作为本技术方案的进一步限定，所述底板固定连接一组均匀分布的支撑腿。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

1、本装置通过电机带动，在相关元件的带动下，实现反应盒的运动，反应盒相互靠近时，方便实现稀释液的添加，方便观察检测结果，方便对比观察病毒与试剂反应后现象。反应盒相互远离时，空气隔热效果最佳，防止各个不同检测液体相互污染。

2、本装置通过设置电动推杆二，在相关元件的带动下，实现盖子、加热器及竖管的运动，实现盖子与相应的反应盒相互匹配，方便实现后续的试剂添加，以及对反应盒内液体的加热及保温。

3、本装置通过设置弹簧，辅助L杆的运动，使本装置的运动更加的平稳稳定。

4、本方法通过巧妙地设计，实现猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)S基因、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible troenteritis virus,TGEV)N基因、猪Delta冠状病毒(Porcine delta coronavirus,PDCoV)N基因、猪博卡病毒(Porcinebocavirus,pBCaV)NS1基因、猪诺如病毒(Porcine norovirus,pNoV)RdRp基因、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,pRV)六种病毒进行同时鉴别诊断，节约人力，提高工作效率。

附图说明

图1为本发明的立体结构示意图一。

图2为本发明的局部立体结构示意图一。

图3为本发明的局部立体结构示意图二。

图4为本发明的局部立体结构示意图三。

图5为本发明的局部立体结构示意图四。

图6为本发明的局部立体结构示意图五。

图7为本发明的立体结构示意图二。

图中：1、反应盒，2、L杆，3、回形块，4、底板，5、电机，6、弹簧，7、支撑腿，8、方杆，9、电动推杆一，10、分装盒，11、圆柱，12、齿轮，13、圆环板，14、齿圈，15、圆杆一，16、电动推杆二，17、圆板，18、圆杆二， 19、圆环，20、L形杆，21、槽口杆，22、半球，23、槽口，24、圆轴，25、盖子，26、竖管，27、加热器，28、连杆一，29、连杆二，30、导流管。

具体实施方式

下面结合附图，对本发明的一个具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

如图1-图7所示，本发明包括以下步骤：

步骤一：将处理后的血清、血浆或其他检查样本稀释液加入分装盒10，稀释液从导流管30进入反应盒1内；

步骤二：打开电机5，在相关元件的带动下，使一组所述反应盒1运动到预设位置，实现相邻的所述反应盒1相互远离；

步骤三：打开电动推杆二16，在相关元件的带动下，实现盖子25运动到预设位置；

步骤四：操作电动推杆一9，在相关元件的带动下，实现所述盖子25盖住相应的所述反应盒1；

步骤五：在不同的所述反应盒1内加入不同的试剂，并打开加热器27，使每个所述反应盒1内稀释液及试剂处于不同的温度以及保温不同的时间，保温时间结束后，关闭相应的所述加热器27；

步骤六：依次反向操作所述电动推杆一9、所述电动推杆二16及所述电机 5；

步骤七：观察所述反应盒1内稀释液的变化或提取处理好的稀释液；

所述电机5固定连接底板4，所述电机5的输出轴穿过所述底板4，所述电机5的输出轴固定连接齿轮12，所述底板4固定连接圆柱11，所述圆柱11轴承连接圆环板13，所述圆环板13固定连接齿圈14，所述齿圈14啮合所述齿轮 12，所述圆环板13固定连接一组均匀分布的圆杆一15，每个所述圆杆一15分别转动连接连杆一28的一端，每个所述连杆一28的另一端分别转动连接L杆2，每个所述L杆2的横杆分别穿过回形块3，每个所述回形块3分别固定连接所述底板4，每个所述L杆2的竖杆分别固定连接对应的所述反应盒1。

所述步骤二的具体步骤如下：所述电机5带动所述齿轮12转动，所述齿轮 12带动所述齿圈14转动，所述齿圈14带动所述圆环板13转动，所述圆环板 13带动所述圆杆一15摆动，所述圆杆一15带动所述连杆一28摆动，所述连杆一28带动所述L杆2沿所述回形块3移动，所述L杆2带动所述反应盒1移动。

所述圆柱11固定连接所述分装盒10，所述分装盒10固定连通一组均匀分布的所述导流管30。

所述分装盒10固定连接所述电动推杆一9，所述电动推杆一9的推杆端固定连接方杆8，所述方杆8固定连接圆环19，所述圆环19固定连接一组均匀分布的圆杆二18，每个所述圆杆二18分别固定连接圆板17，所述圆板17固定连接所述电动推杆二16，所述电动推杆二16的推杆端穿过所述圆板17，所述电动推杆二16的推杆端固定连接半球22，所述半球22设置有一组均匀分布的槽口23，每个所述槽口23内分别设置有圆轴24，每个所述圆轴24分别固定连接所述半球22，每个所述圆轴24分别转动连接连杆二29的一端，每个所述连杆二29的另一端分别转动连接槽口杆21，每个所述槽口杆21分别穿过所述圆环 19，每个所述圆环19分别固定连接L形杆20，每个所述L形杆20分别固定连接对应的所述盖子25，每个所述盖子25分别固定连接对应的所述加热器27，每个所述盖子25分别固定连接一组均匀分布的所述竖管26。

所述步骤三的具体步骤如下：所述电动推杆二16带动所述半球22移动，所述半球22带动所述圆轴24移动，所述圆轴24带动所述连杆二29摆动，所述连杆二29带动所述槽口杆21移动，所述槽口杆21带动所述L形杆20、所述盖子25、所述加热器27及所述竖管26移动。

所述步骤四的具体步骤如下：所述电动推杆一9带动所述方杆8、所述圆环 19、所述圆杆二18、所述圆板17、所述电动推杆二16、所述半球22、所述圆轴24、所述连杆二29、所述槽口杆21、所述L形杆20、所述盖子25、所述加热器27及所述竖管26移动。

所述盖子25下表面采用橡胶材料，使所述盖子25与所述反应盒1接触时实现密封。

每个所述L杆2分别固定连接弹簧6的一端，每个所述弹簧6的另一端分别固定连接。

所述电机5、所述电动推杆一9及所述电动推杆二16分别电性连接控制器。

所述底板4固定连接一组均匀分布的支撑腿7。

所述加热器27电性连接所述控制器。

本发明的工作流程为：对控制器进行调试，使控制器控制电动推杆一9、电动推杆二16及电机5的运动。

不同病毒对应的检验试剂不同，竖管26通过软管连接相应的原料箱上的液泵，将液泵电性连接控制器。

将处理后的血清、血浆或其他检查样本稀释液加入分装盒10，稀释液从导流管30进入反应盒1内。

打开控制器，控制器打开电机5，电机5带动齿轮12转动，齿轮12带动齿圈14转动，齿圈14带动圆环板13转动，圆环板13带动圆杆一15摆动，圆杆一15带动连杆一28摆动，连杆一28带动L杆2沿回形块3移动，L杆2带动反应盒1移动。使一组反应盒1运动到预设位置，实现相邻的反应盒1相互远离。

控制器打开电动推杆二16，电动推杆二16带动半球22移动，半球22带动圆轴24移动，圆轴24带动连杆二29摆动，连杆二29带动槽口杆21移动，槽口杆21带动L形杆20、盖子25、加热器27及竖管26移动。，实现盖子25运动到预设位置。

控制器操作电动推杆一9，电动推杆一9带动方杆8、圆环19、圆杆二18、圆板17、电动推杆二16、半球22、圆轴24、连杆二29、槽口杆21、L形杆20、盖子25、加热器27及竖管26移动，实现盖子25盖住相应的反应盒1。

控制器通过控制液泵，在不同的反应盒1内加入不同的试剂，并打开加热器27，使每个反应盒1内稀释液及试剂处于不同的温度以及保温不同的时间，保温时间结束后，控制器关闭相应的加热器27。

控制器依次反向操作电动推杆一9、电动推杆二16及电机5。

观察反应盒1内稀释液的变化或提取处理好的稀释液。

本装置通过电机5带动，在相关元件的带动下，实现反应盒1的运动，反应盒1相互靠近时，方便实现稀释液的添加，方便观察检测结果，方便对比观察病毒与试剂反应后现象。反应盒1相互远离时，空气隔热效果最佳，防止各个不同检测液体相互污染。

本装置通过设置电动推杆二16，在相关元件的带动下，实现盖子25、加热器27及竖管26的运动，实现盖子25与相应的反应盒1相互匹配，方便实现后续的试剂添加，以及对反应盒1内液体的加热及保温。

本装置通过设置弹簧6，辅助L杆2的运动，使本装置的运动更加的平稳稳定。

本方法通过巧妙地设计，实现猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrheavirus,PEDV)S基因、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible troenteritis virus,TGEV)N基因、猪Delta冠状病毒(Porcine delta coronavirus,PDCoV)N基因、猪博卡病毒(Porcinebocavirus,pBCaV)NS1基因、猪诺如病毒(Porcine norovirus,pNoV)RdRp基因、猪轮状病毒(Porcine rotavirus,pRV)六种病毒进行同时鉴别诊断，节约人力，提高工作效率。

以上公开的仅为本发明的具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。