能够耐受高光强的集胞藻驯化菌株的驯化方法

摘要

本发明公开了一种获得耐受高光强集胞藻菌株的定向驯化方法，步骤：确定集胞藻野生型菌株的初始敏感光照强度；在培养基中接种集胞藻野生型菌液使酶标仪测定OD

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物领域，具体涉及能够耐受高光强的集胞藻驯化菌株的驯化方法。

背景技术

化石燃料是不可再生的资源，过多使用会释放大量的温室气体到大气中，导致全球变暖。因此，探索可再生和绿色的生物能源以替代传统的化石能源并减轻环境污染是我们迫切需要解决的问题。经由光合作用，每年约2580亿吨CO

光作为蓝细菌进行光合作用的能量来源，在蓝细菌的生长过程中是必不可少的。但是，早期研究表明，过多的光能会破坏蓝细菌的能量供应和消耗之间的平衡，从而导致细胞内的毒性活性氧(ROS)积累，包括过氧化氢(H

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供能够耐受高光强的集胞藻驯化菌株的驯化方法。

本发明的技术方案概述如下：

能够耐受高光强的集胞藻驯化菌株的驯化方法，包括如下步骤：

(1)通过体外敏感实验确定集胞藻野生型菌株的初始敏感光照强度；

(2)在液体BG11培养基中接种集胞藻野生型菌液使酶标仪测定OD

(3)将步骤(2)培养至平台期的细胞转接入液体BG11培养基，在初始敏感光照强度下继续驯化，以此连续传代培养至集胞藻在平台期的酶标仪测定OD

(4)逐步提高光照条件，继续驯化，以此连续传代培养至光照强度到2000μmol光子m

菌种优选：集胞藻(Synechocystis sp.PCC 6803)ATCC 27184。

逐步提高光照条件为光照强度从初始敏感光照强度至2000μmol光子m

初始敏感光照强度为100μmol光子m

本发明的优点：

本发明的方法获得的集胞藻驯化菌株能够耐受2000μmol光子m

附图说明

图1为野生型菌株和驯化菌株在2000μmol光子m

图2为野生型菌株和驯化菌株在2000μmol光子m

图3为野生型菌株和驯化菌株在2000μmol光子m

图4为野生型菌株和驯化菌株在2000μmol光子m

图5为野生型菌株和驯化菌株在2000μmol光子m

具体实施方式

本发明各实施例使用集胞藻(Synechocystis sp.PCC 6803)，该菌购自美国菌株保藏中心ATCC，菌株代码ATCC 27184。菌株购买于2012.5.30。

下面的实施例是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明但并不用于限制本发明。下面结合具体实施例对本发明作进一步说明：

配制液体BG11培养基配方:NaNO

实施例1

能够耐受高光强的集胞藻驯化菌株的驯化方法，包括如下步骤：

(1)通过体外敏感实验确定集胞藻野生型菌株的初始敏感光照强度；具体步骤是：在25mL液体BG11培养基中接种集胞藻野生型菌液(集胞藻PCC 6803菌液)使酶标仪测定OD

(2)在25mL液体BG11培养基中接种集胞藻野生型菌液使酶标仪测定OD

(3)将步骤(2)培养至平台期的细胞转接入液体BG11培养基，在100μmol光子m

(4)在100μmol光子m

检测：

1.实施例1获得的能够耐受高光强的集胞藻驯化菌株(简称驯化菌株)和集胞藻野生型(集胞藻PCC 6803，简称野生型菌株)生长曲线：

在25mL液体BG11培养基中接种驯化菌株和野生型菌株使酶标仪测定OD

2.驯化菌株和野生型菌株干重特性的分析：

在25mL液体BG11培养基中接种驯化菌株和野生型菌株使酶标仪测定OD

3.驯化菌株和野生型菌株的叶绿素a含量和类胡萝卜素含量的测定：

在25mL液体BG11培养基中接种驯化菌株和野生型菌株使酶标仪测定OD

4.驯化菌株和野生型菌株糖原含量的测定：在25mL液体BG11培养基中接种驯化菌株和野生型菌株使酶标仪测定OD