含有杂环化合物的新颖抗疟剂

摘要

本文披露了具有抗疟激活作用的二氨基吡啶化合物或其药学上可接受的盐。

说明书

技术领域

本发明涉及含有杂环化合物的新颖抗疟剂。

背景技术

疟疾是由疟原虫(Plasmodium)原生动物引起的危及生命的传染病。在2018年，估计有2.28亿人被感染，40.5万人死亡，主要是非洲国家的儿童。许多国家、公司和科学家正在积极合作，努力实现疟疾的根除。目前治疗疟疾的标准护理通常涉及使用青蒿素的组合疗法。迄今为止，与一些其他获批的抗疟药不同，青蒿素具有非常好的安全特性，几乎没有与其使用相关的不良事件。问题是，含有青蒿素的组合已经与柬埔寨、泰国和越南等地高达45％的耐药率相关(参见NPL 1和2)。鉴于在相当短的时间段内产生的高耐药率，迫切需要一类具有新颖作用机制(MoA)的新化合物来治疗疟疾寄生虫的耐药菌株并支持疟疾根除战略。

糖基磷脂酰肌醇(GPI)是所有真核生物中的常见部分，并且具有将许多蛋白质锚定到细胞表面的作用。GPI的生物合成途径已得到充分研究，并且Gwt1p作为必需酶之一被确定为抗真菌药物的新颖靶标(参见NPL 3至6)。Gwt1p在GPI生物合成途径的早期部分催化肌醇的酰化。在生物学研究过程中发现，编码Gwt1p酶的GWT1基因在包括疟原虫原生动物(即疟疾的病因病原体)在内的真核生物中高度保守。对疟原虫Gwt1p具有抑制活性的初步命中化合物在体外和体内均显示出抗疟原虫活性。因此，选择性地抑制GPI生物合成，特别是肌醇环酰化的化合物可能是非常有用的抗疟剂。

PTL 1是与基于这种机制的抗疟剂有关的现有技术。PTL 1中描述了经由抑制来自疟疾原生动物的GWT1基因产物的活性来抑制GPI的生物合成从而具有抗疟活性的杂环化合物。然而，PTL 1中披露的化合物具有2-苄基吡啶作为共同的结构，并且在结构上与根据本发明的化合物明显不同。

同时，PTL 2是在结构上与根据本发明的杂环化合物(I-IX)最相似的现有技术。PTL 2披露了N-未取代的二氨基吡啶衍生物。然而，PTL 2中不仅没有披露根据本发明的化合物，而且没有披露5-取代的二氨基吡啶衍生物。

引证文献清单

专利文献

[PTL 1]WO 2004/048567

[PTL 2]WO 2006/016548

非专利文献

[NPL 1]Yeung S,Socheat D,Moorthy VS et al.Artemisinin resistance onthe Thai-Cambodian border.Lancet 2009；374:1418-9.

[NPL 2]Hawkes M,Conroy AL,Kain KC.Spread of artemisinin resistance inmalaria.The New England journal of medicine 2014；371:1944-5.

[NPL 3]Okamoto M,Yoko-o T,Umemura M etal.Glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins are required for thetransport of detergent-resistant microdomain-associated membrane proteinsTat2p and Fur4p.The Journal of biological chemistry 2006；281:4013-23.

[NPL 4]Sagane K,Umemura M,Ogawa-Mitsuhashi K et al.Analysis ofmembrane topology and identification of essential residues for the yeastendoplasmic reticulum inositol acyltransferase Gwt1p.The Journal ofbiological chemistry 2011；286:14649-58.

[NPL 5]Tsukahara K,Hata K,Nakamoto K et al.Medicinal geneticsapproach towards identifying the molecular target of a novel inhibitor offungal cell wall assembly.Mol Microbiol 2003；48:1029-42.

[NPL 6]Umemura M,Okamoto M,Nakayama K et al.GWT1 gene is required forinositol acylation of glycosylphosphatidylinositol anchors in yeast.TheJournal of biological chemistry 2003；278:23639-47.

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供优异的抗疟剂。

问题的解决方案

作为解决上述问题的广泛研究的结果，本发明的诸位发明人找到了具有抗疟作用的二氨基吡啶化合物或其药学上可接受的盐。

具体地，本发明涉及以下<1>至<17>。

<1>一种化合物，该化合物选自由以下组成的组：

由下式(I)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

由下式(II)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

由下式(III)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

由下式(IV)表示的2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺：

由下式(V)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

由下式(VI)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

由下式(VII)表示的2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺：

由下式(VIII)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(1-氟环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

以及

由下式(IX)表示的2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<2>一种由下式(I)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<3>一种由下式(II)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<4>一种由下式(III)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<5>一种由下式(IV)表示的2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<6>一种由下式(V)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<7>一种由下式(VI)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<8>一种由下式(VII)表示的2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<9>一种由下式(VIII)表示的(R)-2,6-二氨基-5-(3-(1-氟环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<10>一种由下式(IX)表示的2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺：

或其药学上可接受的盐。

<11>一种药物组合物，该药物组合物包含根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<12>一种抗疟剂，该抗疟剂包含根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<13>一种疟疾预防剂，该疟疾预防剂包含根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<14>一种治疗或预防疟疾的方法，该方法包括向受试者施用根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<15>根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用作药物。

<16>根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗或预防疟疾中使用。

<17>根据<1>至<10>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制造药物组合物的用途，该药物组合物用于治疗或预防疟疾。

本发明的有益效果

根据本发明的由式(I)至(IX)表示的二氨基吡啶化合物(下文统称为本发明的化合物(I)至(IX)或一种或多种化合物)或其药学上可接受的盐具有抗疟激活作用，如以下药理学测试实例中的活性数据所示。由于本发明的化合物(I)至(IX)促成抗疟作用，因此具有用作热带疟疾、间日疟疾、三日疟疾和/或卵形疟疾的预防剂和/或治疗剂的潜在用途。

具体实施方式

以下将详细描述本发明。

在本说明书中，为方便起见，这些化合物的结构式可表示特定异构体；然而，本发明可以包括旋转异构体和互变异构体连同异构混合物，不限于为了方便起见所描述的化学式，并且可以是任何异构体或含有任何比例的异构体的混合物。

此外，还可能存在多态晶体；然而，本发明也不限于它们中的任何一个，并且可以是单晶型或其混合物。此外，本发明还包括无定形形式，并且根据本发明的化合物包括脱水物和溶剂化物(特别是水合物)。

本发明还包括化合物(I)至(IX)的同位素标记的化合物。同位素标记的化合物与化合物(I)至(IX)相同，除了一个或多个原子被具有不同于通常在自然界中发现的那些的原子质量或质量数的一个或多个原子所代替。可以掺入本发明的化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、磷、硫、碘和氯的同位素，并且具体地包括2H、3H、11C、14C、15N、18O、18F、32P、35S、123I、125I等。

以上同位素标记的化合物，例如其中掺入了放射性同位素(如3H和/或14C)的化合物，可用于进行药物和/或底物的组织分布测定。3H和14C因其容易制备和检测而被认为可用。同位素11C和18F被认为可用于PET(正电子发射断层扫描)，同位素125I被认为可用于SPECT(单光子发射计算机化断层扫描)，并且所有这些同位素都可用于脑成像。被更重的同位素(如2H)代替导致一些类型的治疗优势，包括体内半衰期增加或由于更高的代谢稳定性导致的所需剂量降低，并且因此被认为在某些情形下是有用的。可以通过执行以下实例中披露的程序，使用容易使用的同位素标记的试剂代替没有用同位素标记的试剂，来类似地制备以上同位素标记的化合物。

本说明书中的“药学上可接受的盐”没有特别限制，只要它们是用根据本发明的化合物形成的盐，并且具体实例包括酸加成盐，如无机酸盐、有机酸盐、和酸性氨基酸盐。

除非有任何特别限制性描述，本说明书中的“药学上可接受的盐”是以合适的比率形成的任何盐，并且形成的盐中的每个化合物的分子的酸分子的数目没有特别限制；然而，可优选的是，每个化合物的分子的酸分子的数目是约0.5至约2，并且更可优选的是，每个化合物的分子的酸分子的数目是约0.5、约1、或约2。

无机酸盐的优选实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、和磷酸盐；并且有机酸盐的优选实例包括乙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、硬脂酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐和苯磺酸盐。

酸性氨基酸盐的可优选实例包括天冬氨酸盐和谷氨酸盐。

当根据本发明的化合物(I)至(IX)以游离形式获得时，它们可以根据常规方法转化成可以由化合物(I)至(IX)形成的盐或其水合物。

当根据本发明的化合物(I)至(IX)以化合物(I)至(IX)的盐或化合物(I)至(IX)的水合物获得时，它们可以根据常规方法转化成化合物(I)至(IX)的游离形式。

此外，获得自根据本发明的化合物(I)至(IX)的各种异构体(例如旋光异构体、旋转异构体、立体异构体等)可以通过一般分离手段被纯化和分离，如重结晶、非对映体盐方法、酶拆分方法、以及各种色谱技术(例如薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法等)。

药物制剂

根据本发明的药物组合物可以通过将药学上可接受的添加剂与化合物混合来生产，该化合物选自化合物(I)至(IX)或其药学上可接受的盐的组。根据本发明的药物组合物可以通过已知方法来生产，例如，在日本药典第十七版的制剂的通用规则(General Rulesfor Preparations of The Japanese Pharmacopoeia Seventeenth Edition)中所描述的方法。

根据本发明的药物组合物可以取决于其剂型适当地施用至患者。

根据本发明的化合物(I)至(IX)或其药学上可接受的盐的剂量取决于症状的严重程度、年龄、性别、体重、剂型、盐的类型、疾病的具体类型和其他情况；然而，通常，成人每天通过口服施用的剂量为约30μg至10g，优选100μg至5g，并且更优选100μg至1g；成人每天通过注射施用的剂量为约30μg至1g，优选100μg至500mg，并且更优选100μg至300mg；上述剂量施用一次或几次。

术语“疟疾”包括与疟原虫感染有关的疾病和病症。

如本文所用，“治疗(“treatment”和“treating”)”等通常意指获得所需的药理学和生理学作用。该作用就预防或部分预防疾病、其症状或病症而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病、病症、症状或由疾病引起的不良作用而言可以是治疗性的。如本文所用的术语“治疗”涵盖对哺乳动物(特别是人)的疾病的任何治疗，并包括：(a)预防疾病在可能易患该疾病但尚未诊断为患有该疾病的受试者中发生；(b)抑制疾病，即阻止其发展；或缓解疾病，即，使该疾病和/或其症状或病症消退。

术语“有效量”包括“预防有效量”以及“治疗有效量”。

术语“预防有效量”是指当在感染前，即在对疟疾寄生虫的暴露期之前、期间和/或略微之后施用时，有效抑制、降低疟疾寄生虫导致疾病的可能性，或预防疟疾感染或预防疟疾寄生虫导致疾病的延迟发作的本发明化合物的浓度。

术语“预防”包括：因果预防，即包括预防寄生虫红细胞前发育的抗疟活性；抑制性预防，即包括抑制血液阶段感染的发展的抗疟活性；以及终端预防，即包括抑制肝内阶段感染的发展的抗疟活性。这一术语包括：初级预防(即防止初次感染)，其中抗疟化合物在对疟疾寄生虫的暴露期之前、期间和/或之后施用；以及终端预防(即防止疟疾临床症状的复发或延迟发作)，其中抗疟化合物在对疟疾寄生虫的暴露期快结束时和/或稍微之后但临床症状出现之前施用。通常，针对恶性疟原虫(P.falciparum)感染，使用抑制性预防，而针对间日疟原虫(P.vivax)或恶性疟原虫和间日疟原虫的组合，使用终端预防。

同样，术语“治疗有效量”是指对治疗疟疾感染有效的化合物浓度，例如，经显微镜检查，在感染发生后施用时，该化合物浓度可使血液中寄生虫数量减少。

如本文所用的术语“受试者”是指哺乳动物。例如，本发明所考虑的哺乳动物包括人等。

组合物

本发明提供了可用于预防或治疗疟疾的药物组合物。本发明进一步提供了用于治疗患有疟疾的哺乳动物患者、最优选地人患者的方法。

在另一个特定实施例中，提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种本发明的化合物及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

在另一个特定实施例中，提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种本发明的化合物及如下定义的另外的抗疟剂。

在另一个特定实施例中，提供了药物组合物，该药物组合物包含至少一种本发明的化合物及选自下组的至少一种另外的抗疟剂，该组由以下组成：青蒿素及其衍生物，如青蒿素及其衍生物(如蒿甲醚、青蒿琥酯或二氢青蒿素)、氯喹、羟基氯喹、奎宁、奎尼丁、甲氟喹、阿莫地喹(amodiaquine)、阿托伐醌(atovaquone)/氯胍(proguanil)、克林霉素(clindamycin)、强力霉素(doxycycline)、苯芴醇、哌喹、双喹哌、卤泛群(halofantrine)、乙胺嘧啶-磺胺多辛、伯氨喹、奎纳克林(quinacrine)、二茂铁喹(ferroquine)、他非诺喹(tafenoquine)、青蒿氧烷(arterolane)、螺[3H-吲哚-3,1'-[1H]吡啶并[3,4-b]吲哚]-2(1H)-酮、5,7'-二氯-6'-氟-2',3',4',9'-四氢-3'-甲基-,(1'R,3'S)-](西帕加明(Cipargamin)，KAE609，CAS登录号：1193314-23-6)、2-(1,1-二氟乙基)-5-甲基-N-[4-(五氟-λ6-磺酰基)苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(DSM265，CAS登录号：1282041-94-4)、吗啉、4-[2-(4-顺式-二螺[环己烷-1,3'-[1,2,4]三氧杂环戊烷-5',2”-三环[3.3.1.13,7]癸]-4-基苯氧基)乙基]-](阿特芬酮(Artefenomel)，OZ439，CAS登录号：1029939-86-3)、4-喹啉甲酰胺、6-氟-2-[4-(4-吗琳基甲基)苯基]-N-[2-(1-吡咯烷基)乙基]-(DDD107498，CAS登录号：1469439-69-7)、乙酮、2-氨基-1-[2-(4-氟苯基)-3-[(4-氟苯基)氨基]-5,6-二氢-8,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基]-(加那普拉西德(Ganaplacide)，KAF-156，CAS登录号1261113-96-5)、5-[4-(甲基磺酰基)苯基]-6'-(三氟甲基)[3,3'-联吡啶]-2-胺(MMV390048，CAS登录号：1314883-11-8)、4(1H)-喹啉酮、6-氯-7-甲氧基-2-甲基-3-[4-[4-(三氟甲氧基)苯氧基]苯基]-(ELQ-300，CAS登录号：1354745-52-0)和4-异喹啉甲酰胺、N-(3-氰基-4-氟苯基)-1,2,3,4-四氢-1-氧代-3-(3-吡啶基)-2-(2,2,2-三氟乙基)-,(3S,4S)-(SJ-733，CAS登录号1424799-20-1)。

本发明的药物组合物可包含本文所述任何形式的至少一种本发明的化合物。本发明的药物组合物可进一步包含一种或多种药学上可接受的另外的成分，如矾、稳定剂、抗微生物剂、缓冲剂、着色剂、调味剂、佐剂等。

可以将本发明的化合物与常规采用的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂一起置于药物组合物及其单位剂量的形式中，并且以这种形式能以固体(如片剂或填充胶囊)或液体(如溶液、悬浮液、乳剂、酏剂、或用其填充的胶囊)的形式使用，全部用于口服，或以无菌可注射溶液的形式用于肠胃外(包括皮下)使用。此类药物组合物及其单位剂型可包含常规比例的成分，具有或不具有另外的活性化合物或要素，且此类单位剂型可包含与拟用的预期剂量范围相称的任何合适有效量的活性成分。本发明的药物组合物优选口服。

本发明的药物组合物可以是液体配制品，包括但不限于水性的或油性的悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂、和酏剂。适合口服施用的液体形式可以包括含缓冲剂、悬浮剂、分散剂、着色剂、风味剂等的合适的水性或非水性媒剂。药物组合物也可以被配制成干燥产品，用于在使用前用水或其他合适的媒剂重构。此类液体制剂可以含有添加剂，包括但不限于悬浮剂、乳化剂、非水性媒剂和防腐剂。悬浮剂包括但不限于山梨醇糖浆剂、甲基纤维素、葡萄糖/蔗糖糖浆剂、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶、和氢化食用脂肪。乳化剂包括但不限于卵磷脂、山梨醇酐单油酸酯、和阿拉伯胶。非水性媒剂包括但不限于食用油、杏仁油、分馏椰子油、油酯类、丙二醇、和乙醇。防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和山梨酸。在Remington’s“The Science and Practice ofPharmacy”[雷明顿药学的科学与实践],第22版,2012,University of the Sciences inPhiladelphia[费城科学大学],Lippincott Williams&Wilkins[利平科特·威廉斯&威尔金斯出版社]的第5部分中列出了进一步的材料和处理技术等，将其通过引用并入本文。本发明的固体药物组合物可以呈以下形式：按照常规方式配制的片剂或锭剂。例如，用于口服施用的片剂和胶囊可以含有常规的赋形剂，包括但不限于结合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂和润湿剂。结合剂包括但不限于糖浆剂、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、淀粉胶浆和聚乙烯吡咯烷酮。填充剂包括但不限于乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀粉、磷酸钙和山梨醇。润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、聚乙二醇和二氧化硅。崩解剂包括但不限于马铃薯淀粉和羟基乙酸淀粉钠。润湿剂包括但不限于月桂基硫酸钠。可以根据本领域熟知的方法对片剂进行包衣。

可注射药物组合物通常基于可注射无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水或本领域已知的其他可注射载体。

本发明的药物组合物还可以被配制成栓剂，其可以含有栓剂基质，包括但不限于可可脂或甘油酯。本发明的药物组合物还可以被配制用于吸入，其可以呈以下形式，包括但不限于：溶液、悬浮液、或能以干燥粉末施用的乳剂、或使用喷射剂(如二氯二氟甲烷或三氯氟甲烷)的气溶胶形式。本发明的药物组合物也可被配制为包含水性或非水性媒剂的经皮配制品，包括但不限于乳膏、软膏、洗剂、糊剂、医用药膏、贴片或膜。

本发明的药物组合物还可以被配制用于肠胃外施用，包括但不限于通过注射或连续输注施用。用于注射的配制品可以呈油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液、或乳剂的形式，并且可以含有配制剂，这些配制剂包括但不限于悬浮剂、稳定剂、和分散剂。药物组合物还能以粉末形式提供，用于用合适的媒剂(包括但不限于无菌无热原的水)重构。

本发明的药物组合物还可被配制成储库型(depot)制剂，其可以通过植入或肌内注射施用。药物组合物可以用合适的聚合或疏水性材料配制(例如配制成可接受的油中的乳剂)、用离子交换树脂配制，或配制成难溶性衍生物(例如配制成难溶性盐)。

本发明的药物组合物还可以被配制成脂质体制剂。脂质体制剂可以包含脂质体，这些脂质体穿透目的细胞或角质层，并与细胞膜融合，从而将该脂质体的内容物递送至细胞中。其他合适的配制品可以使用非离子型表面活性剂脂质体囊泡(niosome)。非离子型表面活性剂脂质体囊泡是类似于脂质体的脂质囊泡，其膜主要由非离子脂质组成，其中一些形式可有效地将化合物转运穿过角质层。

本发明的化合物也能以缓释形式或从缓释药物递送系统中施用。在Remington’sPharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]的并入材料中也可以找到对代表性缓释材料的描述。

施用模式

本发明的药物组合物能以任何方式施用，包括但不限于口服、肠胃外、舌下、经皮、经阴道、经直肠、经粘膜、局部、经吸入、经口腔或鼻内施用，或其组合。肠胃外施用包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鞘内、和关节内施用。本发明的药物组合物也能以植入物的形式施用，其允许组合物的缓慢释放以及缓慢控制的静脉内输注。在优选的实施例中，口服施用本发明的药物组合物。

组合

本发明的化合物或药物组合物可单独施用或与可用于治疗疟疾的共药剂(如可用于治疗和/或预防疟疾的物质)组合施用，例如像共药剂，包括但不限于青蒿素及其衍生物，如青蒿素及其衍生物(如蒿甲醚、青蒿琥酯或二氢青蒿素)、氯喹、羟基氯喹、奎宁、奎尼丁、甲氟喹、阿莫地喹、阿托伐醌/氯胍、克林霉素、强力霉素、苯芴醇、哌喹、双喹哌、卤泛群、乙胺嘧啶-磺胺多辛、伯氨喹、奎纳克林、二茂铁喹、他非诺喹、青蒿氧烷、螺[3H-吲哚-3,1'-[1H]吡啶并[3,4-b]吲哚]-2(1H)-酮、5,7'-二氯-6'-氟-2',3',4',9'-四氢-3'-甲基-,(1'R,3'S)-](西帕加明，KAE609，CAS登录号：1193314-23-6)、2-(1,1-二氟乙基)-5-甲基-N-[4-(五氟-λ6-磺酰基)苯基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(DSM265，CAS登录号：1282041-94-4)、吗啉、4-[2-(4-顺式-二螺[环己烷-1,3'-[1,2,4]三氧杂环戊烷-5',2”-三环[3.3.1.13,7]癸]-4-基苯氧基)乙基]-](阿特芬酮，OZ439，CAS登录号：1029939-86-3)、4-喹啉甲酰胺、6-氟-2-[4-(4-吗琳基甲基)苯基]-N-[2-(1-吡咯烷基)乙基]-(DDD107498，CAS登录号：1469439-69-7)、乙酮、2-氨基-1-[2-(4-氟苯基)-3-[(4-氟苯基)氨基]-5,6-二氢-8,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基]-(加那普拉西德，KAF-156，CAS登录号1261113-96-5)、5-[4-(甲基磺酰基)苯基]-6'-(三氟甲基)[3,3'-联吡啶]-2-胺(MMV390048，CAS登录号：1314883-11-8)、4(1H)-喹啉酮、6-氯-7-甲氧基-2-甲基-3-[4-[4-(三氟甲氧基)苯氧基]苯基]-(ELQ-300，CAS登录号：1354745-52-0)和4-异喹啉甲酰胺、N-(3-氰基-4-氟苯基)-1,2,3,4-四氢-1-氧代-3-(3-吡啶基)-2-(2,2,2-三氟乙基)-,(3S,4S)-(SJ-733，CAS登录号1424799-20-1)。

本发明涵盖本发明的化合物或药物组合物的施用，其中将该化合物或该药物组合物在另一种治疗方案或可用于治疗疟疾的共药剂(例如多种药物方案)之前、与它们同时或依次以有效量施用于个体。与所述共药剂同时施用的化合物或药物组合物能以一种或多种相同或不同的组合物以及一种或多种相同或不同的施用途径施用。

本发明提供了根据本发明的化合物或方法的用途，其中该化合物与可用于治疗疟疾的共药剂组合施用。在另一实施例中，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的化合物与可用于治疗疟疾的共药剂的组合。

本发明的化合物可以作为用于捕获生物活性低分子量化合物的靶蛋白的化学探针来使用。这就是说，使用例如在J.Mass Spectrum.Soc.Jpn.[日本质谱学会杂志],第51卷,第5期,2003年,第492-498页、WO 2007/139149或类似文献中所描述的方法，通过将标记基团、接头或类似物引入到与化合物的活性发展所必需的结构部分不同的部分中，可以将本发明的化合物转化为亲和色谱探针、光亲和探针等。

用于化学探针中的标记基团、接头等的实例包括由以下(1)至(5)组成的组中所显示的基团：

(1)蛋白质标记基团，如光亲和标记基团(例如，苯甲酰基、二苯甲酮基、叠氮基、羰基叠氮基、二氮丙啶基、烯酮(enone)基、重氮基、硝基等)以及化学亲和基团(例如，其中α碳原子被卤素原子代替的酮基、氨基甲酰基、酯基、烷硫基、迈克尔受体(Michael acceptor)如α,β-不饱和酮或酯、以及环氧乙烷基)；

(2)可裂解的接头，如-S-S-、-O-Si-O-、单糖(葡萄糖基、半乳糖基等)，或二糖(乳糖等)；以及通过酶反应可裂解的寡肽接头；

(3)采捕标签(fishing tag)基团，如生物素和3-(4,4-二氟-5,7-二甲基-4H-3a,4a-二氮杂-4-硼-s-苯并二茚-3-基)丙酰基；

(4)放射性标记基团，如125I、32P、3H、和14C；荧光标记基团，如荧光素、罗丹明、丹酰、伞形酮、7-硝基呋咕基、以及3-(4,4-二氟-5,7-二甲基-4H-3a,4a-二氮杂-4-硼-s-苯并二茚-3-基)丙酰基；化学发光基团，如荧光素和鲁米诺；以及能够检测重金属离子(如镧系元素金属离子和镭离子)的标志物；或

(5)与固相载体附接的基团，这些固相载体如玻璃珠、玻璃床、微量滴定板、琼脂糖珠、琼脂糖床、聚苯乙烯珠、聚苯乙烯床、尼龙珠、以及尼龙床。

通过以上文献或类似文献中描述的方法，通过将选自由以上(1)至(5)组成的组的标记基团等引入本发明的化合物而制备的探针可以用作化学探针以鉴定可用于搜寻新颖的药物设计靶标等的标记蛋白。

以下实例中的化合物的化学名称是使用“E-手册(E-Notebook)2014”第13版(铂金埃尔默有限公司(PerkinElmer Co.,Ltd.))，基于化学结构创建的。使用预填充硅胶柱在Biotage(商标)Isolera Four(商标)上进行硅胶色谱法。

ee测定在岛津公司(Shimadzu)手性HPLC仪器上进行。

HPLC纯化在具有沃特世公司(Waters)SQD质量的沃特世公司MDAP系统上进行

此外，本说明书中使用的缩写是本领域技术人员熟知且常见的。在本说明书中，使用以下缩写。

app：表观

BH3.THF：硼烷-四氢呋喃复合物

c.：浓缩的

DCM：二氯甲烷

DIPEA：N,N-二异丙基乙胺

DMF-DMA：N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛

Dppf：1,1’-二茂铁二基-双(二苯基膦)

EDC.HCl：N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐

HOBT：1-羟基苯并三唑

HPLC：高压液相色谱法

IMS：工业甲基化酒精

LCMS：液相色谱法-质谱法

MDAP：质量导向自动纯化

2-MeTHF：2-甲基四氢呋喃

TBME：叔丁基甲基醚

NBS：N-溴代琥珀酰亚胺

NCS：N-氯代琥珀酰亚胺

NIS：N-碘琥珀酰亚胺

Pd(PPh3)4：四(三苯基膦)钯(0)

PhMe：甲苯

RT：室温

SPhos：2-二环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯基

SQD：单四极杆检测

TBTU：O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸酯

THF：四氢呋喃

本发明的化合物(I)至(IX)可以通过例如以下实例中所描述的方法来生产，并且这些化合物的效果可以通过以下测试实例中所描述的方法来确认。然而，这些仅是实例，并且本发明无论如何不限于以下具体实例并且可以在不偏离本发明范围的范围内被修改。

生产实例1

(R)-2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(I)的制备

步骤1：(R)-4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯甲腈的制备

在氮气下，在0℃下，将(R)-1,1,1-三氟丙-2-醇(2.00ml，21.7mmol)添加到叔丁醇钾(3.47g，30.9mmol)在THF(35mL)中的搅拌悬浮液中。10min后，逐滴添加4-氟苯甲腈(2.5g，20.6mmol)在THF(35mL)中的溶液。1h后，将反应升温至RT。将反应在EtOAc/水之间分配，将有机部分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且蒸发以给出粗油状物(5.4g)。柱色谱法(吸收在c-Hex、0-50％EtOAc/c-Hex、50g硅胶中)给出标题化合物(4.27g)。

1H NMR(600MHz,CDCl3)δppm 1.54(d,J＝6.4Hz,3H)4.74(t,J＝6.1Hz,1H)7.02(d,J＝8.8Hz,2H)7.63(d,J＝8.8Hz,2H)

步骤2：(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺的制备

在0℃下，向(R)-4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯甲腈(4.1g，19.1mmol)在THF(39ml)中的搅拌溶液中逐滴添加THF中的1M硼烷四氢呋喃复合物(38.1ml，38.1mmol)。在0℃下，将反应搅拌1h，升温至RT，然后加热至65℃。使反应冷却至RT，逐滴添加2M HCl(39.0ml，78.0mmol)，并且将混合物在65℃下搅拌2h，然后在100℃下再搅拌2h。使反应混合物冷却，用MeOH稀释，装载到SCX-2柱上，用MeOH洗涤，并且将产物用2M NH3/MeOH洗脱。蒸发合并的NH3/MeOH洗涤物给出标题化合物(3.76g)。

1H NMR(600MHz,CDCl3)δppm 1.49(d,J＝6.6Hz,3H)3.83(s,2H)4.61(t,J＝6.3Hz,1H)6.93(d,J＝8.6Hz,2H)7.24-7.27(m,2H)

步骤3：2,6-二氨基-5-碘烟酸的制备

在RT下，将NIS(1.63g，7.24mmol)经5min分批添加到2,6-二氨基烟酸(1.01g，6.60mmol)在DMF(20ml)中的搅拌悬浮液中。将起始材料加热并且进行超声处理以破碎成更小的碎片。将反应用1M NaOH稀释，并且用EtOAc分配。将各层分离，并且将水性部分用c.HCl酸化至pH 6。形成沉淀物，将该沉淀物过滤，用水、EtOAc洗涤，并且在真空下干燥以给出标题化合物(1.28g)。

1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 6.35(br s,2H)6.97(br s,2H)8.01(s,1H)12.15(br s,1H)

步骤4：(R)-2,6-二氨基-5-碘-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

向2,6-二氨基-5-碘烟酸(1g，3.58mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌溶液中添加HOBTH2O(0.659g，4.30mmol)和EDC HCl(0.824g，4.30mmol)。5min后，逐滴添加(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺(0.825g，3.76mmol)和三乙胺(2.00ml，14.3mmol)在DMSO(10mL)中的溶液，并且将所得溶液在RT下搅拌20h。将反应在EtOAc/水之间分配，将有机部分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且蒸发以给出橙色残余物(2.15g)。通过柱色谱法(20％-80％EtOAc/c-Hex，25g KP-Sil)纯化给出标题化合物(1.08g)。

1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.39(d,J＝6.4Hz,3H)4.30(d,J＝5.7Hz,2H)5.16(app spt,J＝6.5Hz,1H)6.13(br s,2H)7.02(d,J＝8.6Hz,2H)7.07(br s,2H)7.23(d,J＝8.4Hz,2H)8.11(s,1H)8.51(t,J＝5.8Hz,1H)

步骤5：(R)-2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(I)的制备

将DMF(2ml)中的(R)-2,6-二氨基-5-碘-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(120mg，0.25mmol)、3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(47.9mg，0.35mmol)、碘化铜(I)(52.3mg，0.275mmol)、N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺(0.043ml，0.275mmol)和磷酸钾(106mg，0.50mmol)用氮气脱气，并且在120℃下加热18h(密封管)。将反应混合物用MeOH稀释，装载到SCX-2上。用MeOH洗涤，用2M NH3/MeOH/DCM洗脱以给出棕色油状物(0.14g)。通过柱色谱法(20％-100％EtOAc/c-Hex，KP-Sil)纯化。将相关级分合并，蒸发以给出标题化合物(21mg)。

1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.38(d,J＝6.4Hz,3H)4.31(d,J＝5.7Hz,2H)5.15(dt,J＝12.8,6.4Hz,1H)6.39(s,2H)7.01(d,J＝8.4Hz,2H)7.23(d,J＝8.4Hz,2H)7.42(brs,2H)7.92(s,1H)8.41(br t,J＝5.8Hz,1H)8.97(s,1H)

(R)-2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(I)的制备

步骤1：3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑的制备

在10℃下，向水合肼(100mL，2052mmol)在EtOH(2.6L)中的搅拌溶液中逐滴添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(257mL，2161mmol)(CAS 1194-02-1，Fluorochem公司)。将该混合物在RT下搅拌16h。添加乙酸亚氨基甲酰胺(247g，2377mmol)，并且将混合物加热至回流，持续9h。添加AcOH(148mL，2585mmol)，并且将EtOH通过蒸发除去。将所得溶液用饱和NaHCO

步骤2：(2,6-二新戊酰胺基吡啶-3-基)硼酸的制备

在N

步骤3：N,N'-(3-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)的制备

向(2,6-二新戊酰胺基吡啶-3-基)硼酸(30g，93.4mmol)和DMF(600mL)的搅拌溶液中添加(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(19.2g，140mmol)、乙酸铜(II)(1.70g，9.34mmol)和吡啶(18.9mL，234mmol)。将低真空放置在三颈烧瓶上，使空气通过含有无水CaCl

步骤4：N,N'-(3-溴-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)的制备

在RT下，向N,N'-(3-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)(76.1g，184mmol)在DMF(1L)中的搅拌溶液中添加NBS(34.5g，194mmol)。将混合物加热至70℃，持续40分钟，然后冷却至22℃，并且伴随搅拌倒入冰水(3L)中。在RT下搅拌30分钟后，将沉淀物通过过滤收集。将固体在EtOAc(500mL)与H

步骤5：2,6-二新戊酰胺基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酸乙酯的制备

将EtOH(152mL)、PhMe(1.1L)和Et

步骤6：2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酸的制备

在80℃下，向2,6-二新戊酰胺基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酸乙酯(84g，174mmol)在IMS(432mL)中的搅拌溶液中添加4M NaOH水溶液(867mL，3467mmol)。将混合物加热至回流，持续5h，并伴随搅拌将冷却的混合物用冰水(1.3L)稀释，过滤，并且蒸发以除去残留IMS。将水性混合物用TBME(2x1.5L)洗涤，并且用c.HCl(50mL)和2M HCl(300mL)溶液酸化至pH5，并在RT下静置18h，形成沉淀物。将固体通过过滤收集，用水(2x300mL)和Et

步骤7：(R)-2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

在RT下，向2,6-二氨基-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酸(44.6g，155mmol)和TBTU(52.2g，163mmol)在DMF(650mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(108mL，619mmol)。将混合物在RT下搅拌15分钟。添加(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺盐酸盐(41.5g，163mmol)，并且将混合物在RT下搅拌1h。将混合物用EtOAc(1.2L)和半饱和的盐水溶液(1L)稀释，并且将有机层用水(500mL)洗涤，用盐水(500mL)稀释，并且通过Celite(商标)用EtOAc(1L)过滤。将有机层用盐水(500mL)洗涤，经MgSO

(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(II)的制备

步骤1：N,N'-(吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)的制备

在N

步骤2：2,6-二新戊酰胺烟酸锂的制备

在N

步骤3：2,6-二氨基烟酸的制备

向2,6-二新戊酰胺烟酸锂(67.1g，205mmol)中添加4M NaOH水溶液(360mL)，并且将混合物在100℃下搅拌90分钟。将混合物冷却至0℃，并且逐滴添加c.HCl(118mL，1439mmol)。然后将混合物用c.HCl进一步酸化至pH 4，形成沉淀物，将该沉淀物通过过滤收集，用水(100mL)和Et

步骤4：2,6-二氨基-5-氯烟酸的制备

向2,6-二氨基烟酸(1.50g，9.80mmol)在DMF(20mL)中的浆液中添加NCS(1.50g，11.3mmol)，并且将混合物在50℃下搅拌2h。将冷却的混合物在EtOAc与1M NaOH水溶液之间分配，将各层分离，并且将有机层用1M NaOH(100mL)萃取。将水性萃取物用c.HCl酸化至pH5，形成沉淀物，将该沉淀物经由过滤收集，用水(50mL)然后EtOAc(50mL)洗涤，并且在真空下干燥以得到标题化合物(1.29g)。LCMS：m/z 188/190[M+H]

步骤5：(R)-2,6-二氨基-5-氯-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

在RT下，向2,6-二氨基-5-氯烟酸(1.24g，6.62mmol)在DMSO(15mL)中的搅拌溶液中添加HOBT(1.32g，8.60mmol)和EDC.HCl(1.65g，8.60mmol)，随后添加(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺(1.45g，6.62mmol)在DMSO(15mL)和Et

步骤6：(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(II)的制备

将(R)-2,6-二氨基-5-氯-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(150mg，0.386mmol)、1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(188mg，0.772mmol)(CAS 1206640-82-5)、Pd(OAc)

(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(III)的制备

步骤1：(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺盐酸盐的制备

在0℃下，向(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺(4.9g，22.4mmol)在Et

步骤2：1-(二氟甲基)-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑的制备

在N

步骤3：2,6-二氨基-5-碘烟酸的制备

在RT下，向2,6-二氨基烟酸(500mg，3.27mmol)在DMF(10mL)中的搅拌悬浮液中分批添加NIS(808mg，3.59mmol)。5分钟后，将混合物在EtOAc与1M NaOH水溶液之间分配，并且将各层分离。将水层用c.HCl酸化至pH 5，形成沉淀物，将该沉淀物通过过滤收集，用H

步骤4：(R)-2,6-二氨基-5-碘-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

在RT下，向2,6-二氨基-5-碘烟酸(200mg，0.717mmol)和TBTU(276mg，0.860mmol)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(501μL，2.87mmol)。将混合物在RT下搅拌30分钟，添加(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺盐酸盐(220mg，0.860mmol)，并且将混合物在RT下搅拌2h。添加H

步骤5：(R)-2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

将(R)-2,6-二氨基-5-碘-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(50mg，0.104mmol)、1-(二氟甲基)-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(55mg，0.213mmol)、Pd(OAc)

2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺(IV)的制备

步骤1：(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)甲胺盐酸盐的制备

在N

步骤2：2,6-二氨基-5-溴烟酸的制备

在RT下，向细粉状的2,6-二氨基烟酸(5.69g，37.2mmol)在AcOH(31mL)中的悬浮液中缓慢添加Br

步骤3：2,6-二氨基-5-溴-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺的制备

在RT下，向2,6-二氨基-5-溴烟酸(4g，17.2mmol)在DMSO(60mL)中的搅拌溶液中添加Et

步骤4：2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺的制备

将2,6-二氨基-5-溴-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺(30mg，0.07mmol)、3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(13.73mg，0.10mmol)(CAS 60406-75-9，Enamine公司)、碘化铜(I)(15.0mg，0.079mmol)、(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-环己二胺(12.41μL，0.079mmol)和K

(R)-2,6-二氨基-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(V)的制备

步骤1：3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑的制备

在0℃下，向水合肼(18.6mL，383mmol)在EtOH(500mL)中的搅拌溶液中逐滴添加二氟乙酸乙酯(42.4mL，403mmol)(CAS454-31-9)。将混合物在RT下搅拌16h。添加乙酸亚氨基甲酰胺(46.1g，443mmol)，并且将混合物加热至回流，持续5h。向冷却的混合物中添加AcOH(34.6mL，604mmol)，并且将EtOH通过蒸发除去。将混合物用水(200mL)稀释，并且用固体Na

步骤2：N,N'-(3-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)的制备

向(2,6-二新戊酰胺基吡啶-3-基)硼酸(500mg，1.56mmol)在DMF(600mL)中的搅拌溶液中添加3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑(204mg，1.71mmol)、乙酸铜(II)(28.3mg，0.156mmol)和吡啶(0.315mL，3.89mmol)。将低真空放置在三颈烧瓶上，使空气通过含有无水CaCl

步骤3：N,N'-(3-溴-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)的制备

在RT下，向N,N'-(3-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)吡啶-2,6-二基)双(2,2-二甲基丙酰胺)(3.13g，7.94mmol)在DMF(58mL)中的搅拌溶液中添加NBS(1.41g，7.94mmol)。将混合物加热至70℃，持续20分钟，并且将冷却的混合物倒入冰水(120mL)中并搅拌5分钟，形成沉淀物，该沉淀物通过过滤收集，用H

步骤4：5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2,6-二新戊酰胺烟酸乙酯的制备

将EtOH(14mL)、PhMe(113mL)和Et

步骤5：2,6-二氨基-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酸的制备

在80℃下，向5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-2,6-二新戊酰胺烟酸乙酯(7.44g，16.0mmol)在IMS(40mL)中的搅拌溶液中添加4M NaOH水溶液(80mL，319mmol)。将混合物加热至回流，持续3h，然后冷却，并且伴随搅拌用H

步骤6：(R)-2,6-二氨基-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

在RT下，向2,6-二氨基-5-(3-(二氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酸(3.35g，12.4mmol)和TBTU(4.18g，13.0mmol)在DMF(45mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(8.65mL，49.5mmol)。将混合物在RT下搅拌15分钟，添加(R)-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苯基)甲胺(3.12g，14.2mmol)在DMF(5mL)中的溶液，并且将混合物在RT下搅拌40分钟。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，用H

(R)-2,6-二氨基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(VI)的制备

步骤1：3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑的制备将5-氯-3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑(120mg，0.647mmol)(CAS 1340078-75-2)在IMS(3mL)中的搅拌溶液用N

步骤2：(R)-2,6-二氨基-5-(3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

将(R)-2,6-二氨基-5-碘-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(50mg，0.104mmol)、3-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,2,4-三唑(20.5mg，0.135mmol)、碘化铜(I)(21.8mg，0.115mmol)、(R,R)-(-)-N,N’-二甲基-1,2-环己二胺(18.1μL，0.115mmol)和K

2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺(VII)的制备

步骤1：(E)-N-((二甲基氨基)亚甲基)-1-(三氟甲基)环丙烷-1-甲酰胺的制备

将1-(三氟甲基)环丙烷-1-甲酰胺(200mg，1.31mmol)(CAS1628184-67-7)在DMF-DMA(2.62mL，19.6mmol)中的溶液在RT下搅拌1h。将混合物蒸发以得到标题化合物(272mg)。LCMS：m/z 209[M+H]

步骤2：3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1H-1,2,4-三唑的制备

在0℃下，向(E)-N-((二甲基氨基)亚甲基)-1-(三氟甲基)环丙烷-1-甲酰胺(208mg，0.999mmol)在AcOH(4mL)中的搅拌溶液中添加水合肼(0.053mL，1.10mmol)。将混合物升温至RT并搅拌2h，然后加热至50℃，持续1.5h。将混合物蒸发，并且将残余物用Et

步骤3：2,6-二氨基-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)-5-(3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)烟酰胺的制备

将2,6-二氨基-5-溴-N-(4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺(50.0mg，0.119mmol)、3-(1-(三氟甲基)环丙基)-1H-1,2,4-三唑(27.5mg，0.155mmol)、碘化铜(I)(25.0mg，0.131mmol)、K

(R)-2,6-二氨基-5-(3-(1-氟环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(VIII)的制备

步骤1：1-氟环丙烷-1-甲酰胺的制备

在RT下，向1-氟环丙烷-1-甲酸(700mg，6.73mmol)(CAS 137081-41-5)在DMF(25mL)中的搅拌溶液中添加NH

步骤2：(E)-N-((二甲基氨基)亚甲基)-1-氟环丙烷-1-甲酰胺的制备

在RT下，将1-氟环丙烷-1-甲酰胺(180mg，1.75mmol)在DMF-DMA(3.5mL，26.1mmol)中的溶液搅拌1h。将混合物蒸发以得到标题化合物(276mg)。LCMS：m/z 159[M+H]

步骤3：5-(1-氟环丙基)-1H-1,2,4-三唑的制备

在RT下，向(E)-N-((二甲基氨基)亚甲基)-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(276mg，1.75mmol)在AcOH(7mL)中的搅拌悬浮液中添加水合肼(0.093mL，1.92mmol)。将混合物在RT下搅拌2h，蒸发至10％体积，并且将残余物用饱和NaHCO

步骤4：(R)-2,6-二氨基-5-(3-(1-氟环丙基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺的制备

将(R)-2,6-二氨基-5-碘-N-(4-((1,1,1-三氟丙-2-基)氧基)苄基)烟酰胺(48.0mg，0.100mmol)、3-(1-氟环丙基)-1H-1,2,4-三唑(18mg，0.140mmol)、碘化铜(I)(21.0mg，0.11mmol)、K

2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)甲酸烟酰胺(IX)的制备

步骤1：2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯甲腈的制备

在0℃下，向2-氟-4-羟基苯甲腈(2.50g，18.2mmol)(CAS 82380-18-5)和Cs

步骤2：(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)甲胺盐酸盐的制备

在0℃下，向2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苯甲腈(3.92g，17.9mmol)在THF(36mL)中的搅拌溶液中添加BH

步骤3：2,6-二氨基-5-溴-N-(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺的制备

在RT下，向2,6-二氨基-5-溴烟酸(1.00g，4.31mmol)在DMSO(14mL)中的搅拌溶液中添加Et

步骤4：2,6-二氨基-5-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)甲酸烟酰胺的制备

将2,6-二氨基-5-溴-N-(2-氟-4-(2,2,2-三氟乙氧基)苄基)烟酰胺(40mg，0.091mmol)、1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(27mg，0.11mmol)(CAS 1206640-82-5)、Pd(PPh

药理学测试实例

使用化合物I至IX进行以下药理学测试。

恶性疟原虫菌株3D7(氯喹敏感型)和K1(氯喹耐药型)获得自北里大学(KitasatoUniversity)，并且用于体外测试抗疟活性。恶性疟原虫的培养是根据Trager的方法(Trager,W和Jensen以及J.,Human malaria parasites in continuous culture[连续培养中的人类疟疾寄生虫].Science[科学],193:673-677,1976)进行的，并做了一些修改。准确地说，将寄生虫保存在含有RPMI1640培养基(该培养基补充有10％的人血浆和2％的新鲜人红细胞)的培养瓶中，并在37℃下，在5％CO2和5％O2的气体条件下孵育。寄生虫血症(受感染的红细胞占总红细胞的百分比)保持在0.25％-10％以内。每2-3天更换培养基并提供新鲜红细胞。药物敏感测试是根据Desjardins的方法(Desjardins,R.E.,Canfield,C.J.,Haynes,D.E.和Chulay,J.D.,Quantitative assessment of antimalarial activity invitro by a semiautomated microdilution technique.[通过半自动微量稀释技术对体外抗疟活性的定量评估]Antimicrob.Agents Chemother.[抗微生物剂与化疗杂志],16:710-718,1979)进行的，并做了一些修改。同时测试了化合物I至IX和已知的抗疟剂(氯喹和青蒿素)。准确地说，将199μL的寄生虫培养物(2％血细胞比容和0.75％-1％寄生虫血症)和1μL的用DMSO连续稀释的化合物溶液倒入96孔滴定板的每个孔中，并且最终药物浓度设定在0.001-1μg/mL之内。将板在37℃下，在5％CO2和5％O2的气体条件下保持72小时，然后用检测疟原虫的乳酸脱氢酶的Makler方法(Makler,M.T.,Rise,J.M.,Williams,J.A.,Bancroft,J.E.,Piper,R.C.,Gibbins,B.L.和Hinrichs,D.J.,Parasite lactatedehydrogenase as an Assay for Plasmodium falciparum drug sensitivity.[利用寄生虫乳酸脱氢酶测定恶性疟原虫药物敏感性]Am.J.Med.Hyg.[美国热带医学与卫生杂志],48:739-741,1993)对寄生虫生长进行定量，并做了一些修改。准确地说，将培养板在冰箱中保持过夜，然后在37℃下解冻，以破坏红细胞和寄生虫细胞。在新的96孔滴定板中，将100μL的酶反应溶液(110mM乳酸锂、0.5mM乙酰吡啶-腺嘌呤二核苷酸、50mM Tris(pH 7.5)、10mMEDTA、50mM KCl和15g/L PEG6000)和20μL的冻融培养物在每个孔中混合，然后在室温下保持30分钟。通过将等体积的2mg/mL硝基蓝四唑和0.1mg/mL吩嗪硫酸乙酯混合来制备检测溶液，并将20μL的该溶液添加到每个孔中。在室温下避光孵育90分钟后，分析660nm处的吸光度并根据剂量响应曲线计算IC50。化合物I至IX的IC50值报告于表1中。

[表1]

在发现的艺术公司(The Art of Discovery S.L.)(西班牙比斯卡亚(Bizkaia))使用化合物I、II和V进行了人源化鼠疟疾模型的以下药理学测试。简而言之，在药物治疗开始前72h，用被寄生的红细胞静脉内感染植入了人类红细胞的小鼠。通过测量外周血中受感染红细胞的百分比来评估治疗对寄生虫血症的影响。

参考文献(1)中描述了本实验中使用的寄生虫菌株恶性疟原虫Pf3D70087/N9。向免疫缺陷雌性NSG(NOD-scid IL-2Rγ无效)小鼠植入人类红细胞，在整个实验期间，外周血中至少有40％的人类红细胞在循环。向每只小鼠腹膜内(i.p)或静脉内(i.v)接种RPMI1640培养基中的1mL(i.p)或0.7mL(i.v)的50％-75％血细胞比容的红细胞悬浮液、25％(vol/vol)去补体(decomplemented)人血清、3.1mM次黄嘌呤。然后通过静脉内注射0.3mL的1.17x10

(1)Angulo-Barturen等人A murine model of falciparum-malaria by in vivoselection of competent strains in nonmyelodepleted mice engrafted with humanerythrocytes.[通过在植入人类红细胞的非骨髓耗竭小鼠体内选择感受态菌株的恶性疟原虫疟疾的鼠模型]Plos One.[公共科学图书馆·综合]2008年5月21日；3(5):e2252。

(2)Jimenez-Diaz等人Quantitative measurement of Plasmodium-infectederythrocytes in murine models of malaria by flow cytometry usingbidimensional assessment of SYTO-16fluorescence.[使用SYTO-16荧光的二维评估，通过流式细胞术定量测量鼠疟疾模型中疟原虫感染的红细胞]Cytometry A.[细胞计量学A部分]2009年3月；75(3):225-35。

关于预防效果，预期有两种可能性。首先，在肝脏阶段抑制寄生虫成熟，在肝脏阶段通过蚊子注射的子孢子在肝细胞内发育成成熟的裂殖体。据报道，主要的GPI锚定蛋白之一，MSP-1，对这种成熟具有重要作用[1]，因此，预期Gwt1p抑制剂不仅在血液阶段有效，而且在肝脏阶段也有效。为了证实这一点，可以使用蚊子中产生的啮齿类疟疾寄生虫的子孢子进行离体肝细胞感染[2，3]。其次，在血液阶段的第一个周期抑制寄生虫生长可以在疟疾症状出现之前消除寄生虫。在啮齿类疟疾寄生虫鼠模型中证实了血液阶段的治疗活性[3]。可以进行用Gwt1p抑制剂进行预处理的相同实验来证实血液阶段的预防效果。

(1)Kawabata Y,Udono H,Honma K等人Merozoite Surface Protein 1-SpecificImmune Response is Protective against Exoerythrocytic Forms of Plasmodiumyoelii.[裂殖子表面蛋白1特异性免疫响应具有针对约氏疟原虫的红细胞外形式的保护作用]Infection and Immunity[感染与免疫]2002；70:6075-82。

(2)Hovlid ML,Winzeler EA.Phenotypic screens in antimalarial drugdiscovery.[抗疟药发现中的表型筛选]Trends Parasitol.[寄生虫学趋势]2016；32:697-707。

(3)Kato N,Comer E,Sakata-Kato T等人Diversity-oriented synthesisyields novel multistage antimalarial inhibitors.[以多样性为导向的合成产生了新颖的多级抗疟抑制剂]Nature[自然]2016；538:344-349。