一种光敏剂以及提高该光敏剂光动力性能的制备方法及应用

摘要

本发明属于光敏剂的技术领域，具体涉及一种光敏剂以及提高该光敏剂光动力性能的制备方法及应用。所制备的光敏剂的结构通式如下：；所述的R1为I、Br、H；X为I、Br、Cl；R2为C1‑C6的直链或支链烷基。本发明提供一种光敏剂的应用，该光敏剂为近红外光敏剂，光学性能强，可以特异性的靶向肿瘤细胞，同时又对正常细胞损伤微小，甚至是无损伤；并且克服光敏剂和氯尼达明两种不同的药物在体内代谢途径不同，带来的难以同时到达肿瘤部位的缺点；本发明还提供近红外光敏剂的制备方法，且原料易得，反应条件温和，纯化更容易。

说明书

技术领域

本发明属于光敏剂的技术领域，具体涉及一种光敏剂以及提高该光敏剂光动力性能的制备方法及应用。

背景技术

目前，光动力治疗早期癌症，利用的是在一定波长的光照射下，光敏剂将周围的氧气转换为活性氧，然后杀死癌细胞，时空选择性较高，耐药性高，但是，当利用具有光动力性能的光敏剂，主作用于肿瘤组织时，是无法发挥光动力作用的，因为肿瘤组织严重缺氧，在需要的光波下，难以杀死特异性癌细胞。现有技术中，氯尼达明作为化疗药物，能够抑制肿瘤细胞氧的消耗，因此缓解肿瘤部位缺氧的情状，进一步提高、增强光敏剂的光动力效果，但是，光敏剂和氯尼达明同时在体内的代谢途径是不相同的，因此同时到达肿瘤部位的可能性几乎为零，对于此带来的困难，有人提出构建纳米粒子，利用滞留效应（EPR效应）和肿瘤血管的高通透性，将光敏剂和氯尼达明同时递送到肿瘤部位，但纳米粒子的组成相当复杂，仍然在体内无法完全降解，带来更大程度上的副作用，难以根治。

专利CN107266929B提出以菁染料荧光基团为母体骨架结构的近红外荧光染料采用菁染料荧光基团作为母体骨架结构的近红外荧光染料，制备的近红外红荧光染料具有较好生物相容性的亲水分子，作用原理为染料作为疏水端与亲水分子，通过敏感的二硫键加上其他分子连接，作为应用，成为治疗和成像双重功能的诊疗一体化的药物，利用以七甲川花菁染料为母体，选择中位取代基与氧原子连接，但是光动力性能，仍然较低。

专利CN109954140A提出有机分子，结构式为R1-X1-R3-S-S-R4-X2-R2(I)；R3、R4、X1、X2都是独立的化学键；R2是荧光分子基；R1是光敏剂分子基；并且，采用二硫键作为信号分子以下两种分的连接：七甲川花菁类染料和卟啉衍生物；对肿瘤细胞进行成像诊断，依据响应前后的荧光信号变化；肿瘤细胞成像诊断主要靠七甲川花菁染料，而发挥光动力性能的是卟啉分子，并且激发波长为660nm。

“七甲川花菁染料的研究进展 俞开潮，金玲，程红”（华中科技大学化学系，湖北武汉430074）合成化学2004年12月第Ⅰ期，公开了多种方法合成七甲川花菁染料，但是通常其合成为，首先合成所需杂环，再与含有甲川基共轭链类的化合物，进一步合成七甲川花菁染料，并且公布一种通过苯丙冠醚与不饱和环上的取代反应，获得一种新型花菁染料的合成方法。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种光敏剂的应用，该光敏剂为近红外光敏剂，光学性能强，可以特异性的靶向肿瘤细胞，同时又对正常细胞损伤微小，甚至是无损伤；并且克服光敏剂和氯尼达明两种不同的药物在体内代谢途径不同，带来的难以同时到达肿瘤部位的缺点；本发明还提供近红外光敏剂的制备方法，且原料易得，反应条件温和，纯化更容易。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：所制备的光敏剂的结构通式如下：

所述的R

所述的提高该光敏剂光动力性能的制备方法，包括以下步骤：

（1）将苯肼盐酸盐或对位取代苯肼盐酸盐和3-甲基-2-丁酮按照摩尔比为（1:1）-（1:3）混合反应，温度为80-110℃，时间为5-12h，反应完毕，经后处理得到产物A，反应式为：

（2）将产物A与卤代烷按照摩尔比为（1:1）-（1:3）混合反应，温度为80-160℃，时间为12-20h，反应完毕，经后处理得到产物B，反应式为：

（3）按照N,N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷、环己酮按照摩尔比（1:1:1）-（3:1:1）备料，首先将三氯氧磷和N,N-二甲基甲酰胺混合，降温至0℃下反应0.5-2h，然后加入环己酮升温至40-60℃，反应5-8h，最后制得橙红色物质，经后处理得到产物C，反应式为：

（4）将摩尔比为（2:1:1）-（3:1:1）的产物B、产物C、醋酸钠混合反应，温度为70-110℃，时间为1-3h，反应完毕，经后处理得到产物D，反应式为：

（5）将产物D、胱胺二盐酸盐、缚酸剂按照摩尔比（1:1:1）-（3:1:1）备料；制备第一反应液：向N,N-二甲基甲酰胺中加入甲醇、胱胺二盐酸盐、缚酸剂，搅拌0.5-1h；制备第二反应液：产物D和N,N-二甲基甲酰胺混合；向第一反应液滴加第二反应液，进行反应，反应温度20-50℃，反应时间7-9h，去除溶剂后得到产物E，不经过纯化进入步骤（6），反应式为：

（6）将摩尔比为1:1:1:1的氯尼达明、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺、4-二甲胺基吡啶和产物E混合，氮气保护下反应，反应温度为0-5℃，反应时间为5-7h；采用硅胶柱色谱法，利用纯化液梯度纯化，得到目标产物，即动力性能提高的光敏剂，反应式为：

所述的光敏剂的应用：光敏剂与谷胱甘肽发生反应，释放出药物氯尼达明，光敏剂的吸收峰由642-650nm红移到797-808nm；制备的红外光敏剂，可以和化疗药物氯尼达明同时递送到肿瘤部位。

步骤（4）的后处理为：将反应物降至室温，利用析出液析出，抽真空过滤，助溶剂清洗，干燥最后得到产物D。析出液为氯化钠、碘化钾或氯化钾。助溶剂为乙醚或石油醚。

步骤（5）中的缚酸剂是氢氧化钠、三乙胺或吡啶。

步骤（5）甲醇:N,N-二甲基甲酰胺的摩尔比为1:1。

步骤（6）中的纯化液为二氯甲烷与甲醇的混合液，其质量比（200:1）-（10:1），且进行梯度纯化。

所述的光敏剂的应用，制备的红外光敏剂在谷胱甘肽存在下，在808nm激光激发时高效产生活性氧。

制备的光敏剂在抵达肿瘤细胞后，对正常细胞损伤微小，会针对性产生抗肿瘤活性，特异性杀死肿瘤细胞。

具体地，提高该光敏剂光动力性能的制备方法，包括以下步骤：

（1）将苯肼盐酸盐或对位取代苯肼盐酸盐和3-甲基-2-丁酮按照摩尔比为（1:1）-（1:3）混合后加入冰醋酸反应，温度为80-110℃，时间为5-12h，反应完毕，用乙酸乙酯-水进行萃取有机相，除掉乙酸乙酯，制得产物A，产物A的结构式为：

（2）将产物A与卤代烷按照摩尔比为（1:1）-（1:3）备料，先将产物A溶解在（邻二氯苯、甲苯或者乙腈）的溶剂中，再与碘乙烷或者溴乙烷或者氯乙烷反应，反应温度80-160℃，反应时间12-20h；然后过滤，乙酸乙酯清洗，制得产物B，产物B的结构式为：

（3）按照N,N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷、环己酮按照摩尔比（1:1:1）-（3:1:1）备料，将三氯氧磷与N,N-二甲基甲酰胺的混合物，降至0℃下，并搅拌反应0.5-2h，向其中加入环己酮，升至40-60℃，反应5-8h，得到橙红色产物，再降温结晶，析出过滤，制得产物C，产物C的结构式为：

（4）将摩尔比为（2:1:1）-（3:1:1）的产物B、产物C、醋酸钠混合后溶解入醋酸酐溶剂，在温度70-110℃，反应1-3h；降温至室温，加入析出液进行析出，抽真空过滤，再用助溶剂冲洗干净，再干燥制得产物D，产物D的结构式为：

（5）将产物D、胱胺二盐酸盐、缚酸剂按照摩尔比（1:1:1）-（3:1:1）备料；制备第一反应液：向N,N-二甲基甲酰胺中加入甲醇、胱胺二盐酸盐、缚酸剂，搅拌0.5-1h；制备第二反应液：产物D和N,N-二甲基甲酰胺混合；向第一反应液滴加第二反应液，进行反应，反应温度20-50℃，反应时间7-9h，去除溶剂后得到产物E，不经过纯化进入步骤（6），产物E的结构式为：

（6）将摩尔比为1:1:1:1的氯尼达明、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺、4-二甲胺基吡啶和产物E混合，氮气保护下反应，反应温度为0-5℃，反应时间为5-7h；采用硅胶柱色谱法，利用纯化液梯度纯化，得到目标产物，即动力性能提高的光敏剂。

所述的光敏剂的应用：光敏剂与谷胱甘肽发生反应，释放出药物氯尼达明，光敏剂的吸收峰由642-650nm红移到797-808nm；制备的红外光敏剂，可以和化疗药物氯尼达明同时递送到肿瘤部位。

目标产物结构式为：

其中，R

本发明制备的光敏剂，和谷胱甘肽（GSH）发生反应，消耗GSH后降低了GSH的浓度，同时也将药物氯尼达明释放出来，本发明制备的光敏剂将吸收峰从645nm红移到808nm，几乎接近红外窗口；当GSH浓度为10mM时，该光敏剂的单线态氧的产生率为5.37%，相同条件下商用光敏剂吲哚菁绿（ICG）的单线态氧产率仅为2.14%。

本发明制备的光敏剂具有抗肿瘤活性的特性，可以主动靶向肿瘤细胞，并且在肿瘤细胞中同时释放药物氯尼达明，利用氯尼达明抑制肿瘤细胞进行有效性能降低的劣势。

本发明制备的的光敏剂结构中的双硫键，和谷胱甘肽（GSH）发生反应后相当于被GSH切断，然后其红外吸收波长从645nm红移至808nm，808nm的吸收波长更加利于组织穿透，在医学应用上增强光敏剂的光动力治疗，同时利用这种变化，减少正常细胞中GSH的浓度，较低浓度的GSH很难使双硫键断裂，因此本发明制备的光敏剂在正常细胞中最大吸收波长仅为645nm，但在肿瘤细胞中最大吸收波长可达到808nm；由以上可知，即便在808nm激光波长照射下，对正常细胞的损害是微乎其微的，但对对肿瘤细胞仍具有较强的特异性杀死效果。

本发明制备的光敏剂在应用方面，在起初先与化疗药物氯尼达明，以化合物的形式一起进入肿瘤细胞，然后在肿瘤微环境条件时，在肿瘤细胞内分解成两个部分，在光动力治疗癌细胞领域中，互相作用，协同发挥效果；而且制备的光敏剂进入肿瘤细胞后，光敏剂分子吸收波长红移至波长808nm，组织穿透能力加强，提高了光动力性能；本发明制备的光敏剂的再一个最大的效果是在无光照情况下，对正常细胞损伤小，毒害小。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

（1）采用本发明的制备方法得到的光敏剂，采用正电荷更有利于靶向线粒体，结构上的吲哚苯环上链接卤素重原子，增强光敏剂充分发挥光动力性能，进而提高单线态氧的产生率；

（2）采用本发明的制备方法得到的光敏剂，当无GSH或者低浓度GSH时，光敏剂吸收波长是645nm；当GSH高浓度高达10mM时，光敏剂吸收波长是808nm，组织穿透力强；

（3）本发明的光敏剂的制备方法，容易纯化，反应温和，原料易得，降低成本；

（4）本发明的光敏剂的应用，在正常细胞中荧光剂的最大吸收波长为645nm，而在肿瘤细胞中光敏剂的最大吸收波长为808nm；当采用808nm的激光波长照射时，仅能特异性杀死癌细胞，微损伤正常细胞；

（5）本发明的制备的光敏剂，将七甲川荧光染料作为原料与氯尼达明通过双硫键相连成一个化合物，即光敏剂将其送入肿瘤组织后，余高浓度谷胱甘肽（GSH）反应，将双硫键打断，进而在肿瘤细胞中分为两部分，为氯尼达明和光敏剂；既完成两种药物同时递送的目的，同时又能利用氯尼达明抑制肿瘤细胞有氧呼吸的优势，缓解肿瘤细胞对氧气的消耗，提高光敏剂的光动力的效能。

附图说明

图1为实施例1制备的CyBr-SS-L光敏剂的HRMS谱图；

图2为实施例1制备的CyBr-SS-L光敏剂的

图3为实施例2制备的CyI-SS-L光敏剂的HRMS谱图；

图4为实施例2制备的CyI-SS-L光敏剂的

图5为实施例3制备的CyH-SS-L光敏剂的HRMS谱图；

图6为实施例3制备的CyH-SS-L光敏剂的

图7为实施例1-3制备的CyBr-SS-L、CyI-SS-L和CyH-SS-L，在不含GSH或含有1mM浓度的GSH时中，分别做出的紫外吸收光谱；

图8为实施例1-3制备的CyBr-SS-L（a）、CyI-SS-L（b）、CyH-SS-L（c），和ICG（d）在波长808nm激光照射后，时间从0s-180s的单线态氧的产出率的曲线图；

图9为实施例1-3制备的CyBr-SS-L（a）、CyI-SS-L（b）、CyH-SS-L（c），和ICG、对照样在细胞内，单线态氧的产生能力的示意图；

图10为实施例1-3制备的不同浓度的CyBr-SS-L，CyI-SS-L，CyH-SS-L，和ICG、氯尼达明对A375细胞的细胞毒性的示意图；

图11为实施例1-3制备的不同浓度的CyBr-SS-L，CyI-SS-L，CyH-SS-L，和ICG、氯尼达明对4T1细胞的细胞毒性的示意；

图12为实施例1-3制备的不同浓度的CyBr-SS-L，CyI-SS-L，CyH-SS-L，和ICG、氯尼达明对COS-7细胞的细胞毒性的示意。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

提高该光敏剂CyBr-SS-L光动力性能的制备方法，包括以下步骤：

（1）向反应瓶中加入冰醋酸，将4-溴苯肼盐酸盐和3-甲基-2-丁酮按照摩尔比为1:3混合后加入反应瓶，温度为110℃，时间为5h，反应完毕，用乙酸乙酯-水进行萃取有机相，除掉乙酸乙酯，有机层旋干，制得产物A，即5-溴-2,3,3-三甲基-3H-吲哚；

（2）将产物A与碘乙烷按照摩尔比为1:1备料，先将5-溴-2,3,3-三甲基-3H-吲哚和碘乙烷加入反应瓶，溶解在邻二氯苯溶液中，反应温度160℃，反应时间12h，降温至室温；然后抽滤，用乙酸乙酯清洗，干燥得到制得产物B，即状态为粉色固体的吲哚季铵盐，产率为84%；

产物B的ESI-HRMS（电喷雾电离结合高分辨技术质谱）：m/z calcd for [M-I]

产物B

（3）按照N,N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷、环己酮按照摩尔比1:1:1备料，将三氯氧磷（POCl

产物C的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-H]

产物C

（4）将摩尔比为2:1:1的产物B、产物C、醋酸钠混合后溶解入醋酸酐溶剂，反应瓶温度110℃，反应1h；降温至室温，加入碘化钾水溶液进行析出，抽真空过滤，再用乙醚冲洗沉淀，干燥制得产物D，即状态为绿色固体的吲哚花菁染料，记作CyBr，产率72%；

产物D的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

产物D

（5）将产物D、胱胺二盐酸盐、缚酸剂按照摩尔比1:1:1备料；制备第一反应液：向N,N-二甲基甲酰胺中加入甲醇、胱胺二盐酸盐、三乙胺，搅拌0.5-1h；制备第二反应液：产物D和N,N-二甲基甲酰胺混合；向第一反应液滴加第二反应液，进行反应，反应温度35℃，反应时间8h，蒸去溶剂不进行纯化直接进行步骤（6），得到产物E，记作CyBr-SS，DMF:甲醇摩尔比为1:1；

（6）将摩尔比为1:1:1:1的氯尼达明、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺、4-二甲胺基吡啶和产物E混合加入二氯甲烷中，氮气保护下反应，反应温度为0℃，反应时间为7h，然后除去溶剂，采用硅胶柱色谱法，利用DCM和MeOH（100:1）梯度纯化，得到目标产物，即深蓝色固体的动力性能提高的光敏剂CyBr-SS-L，产率52%；

目标产物CyBr-SS-L的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

目标产物CyBr-SS-L的

实施例2

提高该光敏剂CyI-SS-L光动力性能的制备方法，包括以下步骤：

（1）向反应瓶中加入冰醋酸，将4-碘苯肼盐酸盐和3-甲基-2-丁酮按照摩尔比为1:2混合后加入反应瓶，温度为80℃，时间为12h，反应完毕，用乙酸乙酯-水进行萃取有机相，除掉乙酸乙酯，有机层旋干，制得产物A，即5-碘-2,3,3-三甲基-3H-吲哚；

（2）将产物A与溴乙烷按照摩尔比为1:2备料，先将5-碘-2,3,3-三甲基-3H-吲哚和溴乙烷加入反应瓶，溶解在甲苯溶液中，反应温度130℃，反应时间15h，降温至室温；然后抽滤，用乙酸乙酯清洗，干燥得到制得产物B，即状态为粉色固体的吲哚季铵盐，产率为83%；

产物B的ESI-HRMS：ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

产物B

（3）按照N,N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷、环己酮按照摩尔比2:1:1备料，将POCl

产物C的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-H]

产物C

（4）将摩尔比为3:1:1的产物B、产物C、醋酸钠混合后溶解入醋酸酐溶剂，反应瓶温度70℃，反应3h；降温至室温，加入氯化钠水溶液进行析出，抽真空过滤，再用乙醚冲洗沉淀，干燥制得产物D，即状态为绿色固体的吲哚花菁染料，记作CyI，产率74%；

产物D的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

产物D

（5）将产物D、胱胺二盐酸盐、缚酸剂按照摩尔比2:1:1备料；制备第一反应液：向N,N-二甲基甲酰胺中加入甲醇、胱胺二盐酸盐、吡啶，搅拌1h；制备第二反应液：产物D和N,N-二甲基甲酰胺混合；向第一反应液滴加第二反应液，进行反应，反应温度20℃，反应时间9h，蒸去溶剂不进行纯化直接进行步骤（6），得到产物E，记作CyI-SS；DMF:甲醇摩尔比为1:1；

（6）将摩尔比为1:1:1:1的氯尼达明、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺、4-二甲胺基吡啶和产物E混合加入二氯甲烷中，氮气保护下反应，反应温度为5℃，反应时间为6h，然后除去溶剂，采用硅胶柱色谱法，利用DCM和MeOH（200:1）梯度纯化，得到目标产物，即深蓝色固体的动力性能提高的光敏剂CyI-SS-L，产率54%；

目标产物CyI-SS-L的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

目标产物CyI-SS-L的

实施例3

提高该光敏剂CyH-SS-L光动力性能的制备方法，包括以下步骤：

（1）向反应瓶中加入冰醋酸，将苯肼盐酸盐和3-甲基-2-丁酮按照摩尔比为1:1混合后加入反应瓶，温度为100℃，时间为9h，反应完毕，用乙酸乙酯-水进行萃取有机相，除掉乙酸乙酯，有机层旋干，制得产物A，即2,3,3-三甲基-3H-吲哚；

（2）将产物A与氯乙烷按照摩尔比为1:3备料，先将2,3,3-三甲基-3H-吲哚和氯乙烷加入反应瓶，溶解在乙腈溶液中，反应温度80℃，反应时间20h，降温至室温；然后抽滤，用乙酸乙酯清洗，干燥得到制得产物B，即状态为粉色固体的吲哚季铵盐，产率为81%；

产物B的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

产物B

（3）按照N,N-二甲基甲酰胺、三氯氧磷、环己酮按照摩尔比3:1:1备料，将POCl

产物C的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-H]

产物C

（4）将摩尔比为2:1:1的产物B、产物C、醋酸钠混合后溶解入醋酸酐溶剂，反应瓶温度90℃，反应2h；降温至室温，加入氯化钾水溶液进行析出，抽真空过滤，再用石油醚冲洗沉淀，干燥制得产物D，即状态为绿色固体的吲哚花菁染料，记作CyH，产率78%；

产物D的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

产物D

（5）将产物D、胱胺二盐酸盐、缚酸剂按照摩尔比3:1:1备料；制备第一反应液：向N,N-二甲基甲酰胺中加入甲醇、胱胺二盐酸盐、三乙胺，搅拌1h；制备第二反应液：产物D和N,N-二甲基甲酰胺混合；向第一反应液滴加第二反应液，进行反应，反应温度50℃，反应时间7h，蒸去溶剂不进行纯化直接进行步骤（6），得到产物E，记作CyH-SS；

（6）将摩尔比为1:1:1:1的氯尼达明、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺、4-二甲胺基吡啶和产物E混合加入二氯甲烷中，氮气保护下反应，反应温度为3℃，反应时间为6h，然后除去溶剂，采用硅胶柱色谱法，利用DCM和MeOH（10:1）梯度纯化，得到目标产物，即深蓝色固体的动力性能提高的光敏剂CyH-SS-L，产率54%；

目标产物CyH-SS-L的ESI-HRMS：m/z calcd for [M-I]

目标产物CyH-SS-L的

应用

进行体外活性实验：

将实施例1-3制备的CyBr-SS-L、CyI-SS-L和CyH-SS-L，以及及氯尼达明（LNDM）和ICG为原料同时进行体外活性实验；

（1）GSH的裂解实验：首先向GSH的溶液中，将CyBr-SS-L、CyI-SS-L和CyH-SS-L，加入，调整光敏剂浓度为5µM，GSH浓度为10mM；然后将混合物在37℃条件下孵育30min，再将其分别测紫外-可见吸收光谱，检测结果如图7所示由次可以看出，当不加GSH时，光敏剂的吸收波长在642-650nm之间；当加入GSH后，光敏剂的吸收波长在797-808nm；因此，本发明的实施例1-3的制备的光敏剂CyBr-SS-L、CyI-SS-L和CyH-SS-L均被GSH裂解，使得吸收波长红移到800nm左右。

（2）单线态氧产率及活性氧检测：实验步骤为配置1，3二苯基异苯并呋喃（DPBF）溶液，并加入制备的光敏剂，使其浓度分别为5μmol·L

表1 检测结果

（3）活性氧（细胞内）检测：实验步骤为：采用DCFH-DA荧光探针的方法，当4T1细胞贴壁后，分别用浓度为1μM的CyH-SS-L、CyBr-SS-L、CyI-SS-L和ICG光敏剂处理细胞，然后按照DCFH-DA试剂盒的说明书操作，并在波长为808nm，200mW·cm

表明，在波长808nm激光下，本发明制备的CyH-SS-L、CyBr-SS-L、CyI-SS-L光敏剂的绿色荧光信号，要强于ICG组好多倍，并且空白对照组和不光照组并没有观察到明显的荧光信号。

（4）细胞毒性实验：将实施例1-3制备的光敏剂CyBr-SS-L、CyI-SS-L、CyH-SS-L和ICG进行试验，采泳MTT法检测细胞的毒性，运用4T1细胞、A375细胞和COS-7细胞贴壁后，向其中加入不同浓度的光敏剂合物，然后用波长808nm激光，200mW·cm

结果表明，像图10、图11展示的，对4T1细胞和A375细胞，本发明制备的三种光敏剂，在黑暗条件下，均表现出较低的细胞毒性，并且与LNDM实验组结果接近；当经波长808nm光照射1min后，在4T1细胞和A375两种细胞中观察到细胞的毒性明显上升，细胞毒性均比ICG强好多；像图12展示，对COS-7正常细胞几乎没有暗毒性，而且4T1细胞和A375细胞的光毒性明显更强；经过计算，在波长808nm激光照射条件下，分别测其IC

表2 检测结果

综上所述，本发明的光敏剂与谷胱甘肽（GSH）反应，降低GSH浓度，同时释放出药物氯尼达明，使光敏剂的吸收峰从645nm红移至808 nm处，处于近红外窗口；

在GSH浓度为10mM时，本发明制备的光敏剂的单线态氧的产生率达到5.37%，相同条件下，同处于近红外窗口的ICG的单线态氧产率只有2.14%；

本发明的光敏剂能够主动靶向肿瘤细胞，并在肿瘤细胞中释放药物氯尼达明，然后抑制肿瘤细胞的有氧呼吸，进而缓解肿瘤细胞的缺氧状况，这为克服肿瘤细胞缺氧造成的光敏剂光动力性能降低提供了有效途径；从而本发明制备的光敏剂具有抗肿瘤活性，并有效杀死肿瘤细胞，其IC

当然，上述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定对本发明的实施例范围。本发明也并不仅限于上述举例，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的均等变化与改进等，均应归属于本发明的专利涵盖范围内。