一种农杆菌介导甘蔗愈伤组织高效遗传转化方法

摘要

本发明公开了一种农杆菌介导甘蔗愈伤组织高效遗传转化方法，属于组织培养领域。本发明通过增强根癌农杆菌Vir基因诱导活化水平和甘蔗愈伤组织的菌液浸染力度，大幅提高了转基因事件发生频率；在后续共培养、筛选和分化培养基中添加抗氧化剂抑制农杆菌强化浸染引起的愈伤褐化，明显提高了浸染后愈伤的存活率和分化能力；采用同时带有绿色荧光蛋白标记EGFP基因和除草剂草铵膦抗性标记Bar基因的双标记筛选系统，利用EGFP标记可视化无损筛选阳性转基因愈伤，利用Bar标记抗性筛选阳性转基因分化苗，显著提高了转基因事件筛选的准确性，最终实现了根癌农杆菌介导甘蔗愈伤组织的高效遗传转化。