一种发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法

摘要

本发明公开了一种发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化方法，包括以下步骤：先将原始pTargetF质粒改造为包含两个大肠杆菌基因组剪切位点的双J23119 promoter‑N20‑gRNA scaffold结构质粒，同时在质粒上插入用于修复大肠杆菌基因组的两段同源模板及lacY基因的调控序列，得到pTargetT；在大肠杆菌本底菌株转入pCas质粒后，使用阿拉伯糖诱导表达λ‑Red重组酶，随后转入pTargetT编辑质粒，培养过夜并经过筛选后去除pTargetT和pCas质粒，完成发酵乳糖的大肠杆菌基因组优化。本发明克服大肠杆菌自身代谢乳糖的缺陷的同时能保证乳糖作为发酵底物的充分吸收，提高乳糖在发酵过程中的利用率，本方法适用不同lac操纵子的大肠杆菌改造，增加本底菌株的可选项，节省构建菌株时的成本。