一种利用印度洋交替单胞菌制备普鲁兰酶的方法

摘要

本发明属于食品加工技术领域，提供了一种利用印度洋交替单胞菌制备普鲁兰酶的方法。步骤如下：提取菌株Alteromonas sp.162基因组；扩增获得普鲁兰酶基因并构建重组质粒，以重组质粒为模板，扩增获得普鲁兰酶点变体基因h611Q并构建点突变重组质粒，以点突变体重组质粒为模板，扩增普鲁兰酶叠加突变体基因puld5/h611Q，构建叠加突变体重组质粒；将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞，制备并纯化叠加突变体Puld5/H611Q。其优点：Puld5/H611Q比活力最高达145.2U·mg‑1，比鲁兰酶提高2.5倍；Puld5/H611Q最适pH为6.0，最适反应温度为50℃，比普鲁兰酶提高15℃，半衰期为普鲁兰酶的5倍；Puld5/H611Q催化效率约为普鲁兰酶的1.2倍。将截断突变和点突变相结合，制备方法简单，获得的Puld5/H611Q性能优于现有普鲁兰酶，可提高淀粉利用率。