一种特定HBV序列插入到特定基因区域的细胞模型及其构建方法与应用

摘要

本发明公开一种特定HBV序列插入到特定基因区域的细胞模型及其构建方法与应用，该方法步骤如下：利用CRISPR/Cas9方法定点敲入HBV的P序列使其整合到HEPG2细胞的Chr5:1295920位置200bp区域，实现所述Chr5:1295920位置发生切割，形成DNA双链断裂；同时将含有Chr5:1295920目标位点上下游同源臂的DNA片段P载体导入所述HEPG2细胞中，实现HBV的P序列定点整合到HEPG2细胞的Chr5:1295920位置200bp范围内。本发明首先确定了病毒整合热点区域上的位点，进而进行了特定序列的病毒整合，建立了一株具有特殊性质及基因组特征的病毒整合细胞株，其可以广泛应用在肝癌与HBV病毒关系研究，抗病毒药物筛选，病毒整合研究等领域。