CRISPR-Cas9高效敲入嵌合抗原受体基因到T细胞特定基因组位点的方法及应用

摘要

本发明涉及CRISPR‑Cas9高效敲入嵌合抗原受体基因到T细胞特定基因组位点的方法及其应用。本发明具体涉及一种将CAR基因精确敲入到T细胞目的基因组DNA的方法，所述方法包括a)采用基因编辑物质剪切目的基因组DNA，其中所述目的基因组DNA位于基因启动子区后，起始密码子和其所处的外显子3端之间；b)将CAR基因克隆至修复模版载体后导入T细胞，细胞以同源重组方式修复被剪切的目的基因组DNA，从而将CAR基因嵌入，其中所述修复模版载体为腺相关病毒载体。该方法可应用于各种CAR‑T细胞制备。