一种用于外源基因定点插入的基因编辑系统和方法

摘要

本发明实施例公开了一种用于外源基因定点插入的基因编辑系统和方法，基因编辑系统，包括Cas9、sgRNA和ssDNA，所述Cas9和sgRNA构成RNP复合物，所述sgRNA为外源基因的插入位点，所述ssDNA为外源基因的插入模板。本发明主要利用基因编辑技术，通过利用外源基因的模板‑ssDNA作为修复模板，在sgRNA的配合下，成功在AAVS1位点实现1.6kb(CMV‑EGFP‑SV40 PolyA)的定点敲入；AAVS1敲入外源基因片段具有稳定表达、不影响其他基因转录的优点；并且为NK细胞中大片段精确敲入及NK细胞改造，如CAR‑NK细胞的构建提供了一种非病毒非质粒的全新方法。