一种基于小檗碱核酸适配体的核糖开关的设计方法

摘要

一种基于小檗碱核酸适配体的核糖开关的设计方法属于基因表达调控领域，利用SELEX技术从随机单链寡核苷酸文库中筛选出能与BBR结合的亲和力较大的RNA适配体R1，对BBR和R1的亲和力进行表征。以适配体R1为基础，在R1片段的3’端设计包含10个随机寡核苷酸及核糖体结合位点(RBS)序列的片段N10‑RBS，将该R1‑N10‑RBS片段与表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)的载体pBJ23119‑egfp进行连接，然后转化大肠杆菌，挑取阳性克隆测序，确定不同N10的序列，建立转化子库。利用EGFP编码基因egfp为报告基因(GenBank:AF323988.1)，从转化子库中筛选能受BBR调控的核糖开关元件。