一种鸭卵巢颗粒细胞的体外分离纯化培养方法

摘要

本发明公开了一种鸭卵巢颗粒细胞的体外分离纯化培养方法，包括以下步骤：1)取出直径12‑15mm的排卵前卵泡F1‑F6；2)剥除外层血管膜；3)剪开，夹取剩余膜层放入PBS培养皿中震荡、漂洗出白色颗粒细胞层；4)剪碎加入胰蛋白酶消化；5)采用FSHR和LHR抗体将细胞双重特异性标记，流式细胞分选；6)用多聚赖氨酸溶液处理培养皿底部，将细胞悬液进行恒温培养；7)培养24h倒置显微镜下观察细胞形态，HE染色、间接免疫荧光鉴定颗粒细胞特异性。本发明提供的培养方法高效、系统，免去反复冲洗去除卵黄细胞及血细胞，得到的鸭卵巢颗粒细胞纯度高，活力好，鸭卵巢颗粒细胞24h贴壁率及成增殖效率高达80％以上。